Analiza urina i slina za tuberkulozu

Raznolikost različitih analiza za tuberkulozu nije objašnjena jednostavnim dijagnosticiranjem ove bolesti, već njenom podmukaošću. Ljudi od pamtivijeka pokušali su pronaći način otkrivanja potrošnje u ranoj fazi, te su stoga proveli sve vrste studija bolesnika, od kojih su neki zapravo ukorijenjeni kao metode za dijagnozu bolesti ili kao sredstvo praćenja tijeka bolesti.

Što su testovi urina i sline?

Bac analiza za tuberkulozu sline i urina je napravljena za otkrivanje prisutnosti sredstva unutar tijela. Međutim, svrha ovih studija je potvrditi bolest već postojećim simptomima, a ne pronaći, budući da za primarnu preventivnu dijagnozu postoje mnoge druge pouzdanije metode.

Osim toga, mokraći ili ispljuvak i slina analize na TB liječnici mogu obavljati identificirati tranzicije zatvoreni oblik bolesti u otvorenom, koji se odlikuje oslobađanja velike količine bacila s prirodnim tekućine i izmet pacijenta, a time postaju vrlo epidemiološki opasno drugima.

Ispitivanje urina

Odgovor na pitanje kako proći ispit test urina za tuberkulozu je vrlo jednostavan. Urin za tuberkulozu se prikuplja kao svaka opća analiza ove tekućine, poznata svima od djetinjstva:

  1. Ujutro je potrebno sakupiti prvi dio urina, dok se sakupi samo srednji dio, a ne onaj koji napušta prvi ili zadnji.
  2. Prije sakupljanja potrebno je temeljito oprati i kontejner i organe mokraćnog genitalija, tako da se ništa ne može ukrcati u staklenku: protein, krv, mikroba itd.
  3. Potrebna količina tekućine za ispitivanje je samo 50-100 ml, pa nemojte donijeti pola litre mokraće.

OAM se može uzeti u svakoj klinici, međutim, samo specijalni laboratoriji mogu pronaći tuberkulozne tuberkuloze koje nisu dostupne na svim mjestima u Rusiji. Uobičajeni rezultati ovog istraživanja izgledaju ovako:

  1. Boja: žuta, sunčano-žuta ili slama.
  2. Transparentnost: visoka.
  3. Miris: nerazgovjetan.
  4. PH reakcije: 4-7.
  5. Gustoća: 1012-1022 g / l.
  6. Protein: ne, ali ponekad je dopuštena vrijednost do 0,033 g / l.
  7. Glukoza: do 0.8 mmol / l.
  8. Tijela ketona: ne.
  9. Bilirubin: ne.
  10. Urolilinogen: 5-10 mg / l.
  11. Hemoglobin: br.
  12. Eritrociti: u žena, maksimalna dopuštena vrijednost je do tri, au muškaraca do 1 na polju gledišta.
  13. Leukociti: dopušteni broj tijela u području gledanja na 6 u žena i do tri u muškaraca.
  14. Epitelne stanice: do 10 kom. na vidiku.
  15. Cilindri: ne ili postoje pojedinačni hialini.
  16. Soli: ne.
  17. Bakterije: ne.
  18. Gljive: ne.
  19. Paraziti: ne, ali ako postoji, onda nije strašno: upravo u ovom slučaju provodi se terapija anthelmintičkim lijekovima.

OAM indikatori za tuberkulozu obično ostaju isti. Jedine iznimke su akutni oblici bolesti, kada je urin se mijenja zbog abnormalnosti u unutarnje organe i kronične lezije u plućima ili kosti, kada se ovaj test može simptomi amiloidoza - poremećaja metabolizma proteina u kojem će se protein biti prisutne u rezultatima ankete.

Jedina iznimka je tuberkuloza bubrega ili urinarnih trakta - najčešći ekstrapulmonarni oblik bolesti, uzrokovan prijenosom infekcije krvotokom, pri čemu test urina za tuberkulozu jako varira. U tom slučaju u njemu se uočavaju slijedeći fenomeni:

  • oštro kisele ustrajne reakcije;
  • leukociturija - bijele krvne stanice u mokraći;
  • proteinurija - protein u mokraći;
  • eritrociturija - krv u urinu;
  • pyuria - gnoj u urinu.

Također akutnih bolesti ili tijekom tuberkuloze bubrega i mokraćnog sustava infekcija u urinu prisutan bacil aktivni oblik sredstva, koja je određena bojanjem Ziehl-Nelson.

Ispitivanje sline

Zapravo, LHC ne proizvodi test sline za tuberkulozu. Analizirajući sline, vrlo često, neznatni ljudi zovu ispitić sputum za tuberkulozu. Umjesto ispljuvak analiza sline za TB se može obaviti samo u slučaju vrlo malih novorođenčadi koji nisu u stanju pljuvati tekući iskašljavanje jer automatski guta nekada odmah nakon iskašljavanja. Međutim, u ovom slučaju, liječnici jednostavno uzeti biopsiju tkiva ili povući plućni tajnu sa sondom, ne vrvi sline.

Sputum analiza na patogen također se provodi pomoću Tsilya-Nelson metode. U tom slučaju, osim bacila su neki znakovi plućne patologije mogu vidjeti golim okom: vlaknaste baca, gnoj, krv, dijelove tkiva, te tzv leća - velikih inkluzije glupan ili manje okruglog oblika, unutar kojih obično ima veliki broj bacila.

Ziehl-Nelsonova metoda bojenja

Postupak bojanja Ziehl-Nelson temelji na otpornost na kiselinu Mycobacterium tuberculosis, koje se mogu u boji samo toplinske obrade. U vrijeme ove studije, tkiva, sputum, urin, krv, ili bilo koje druge tvari, analiza koja je potrebna prisutnost Ureda ostaviti u povoljnom okruženju za sjeme za razmnožavanje bacila ako su tu, naravno, i onda zagrijava i obojeni. Nakon toga, sve se čuva u kiselini do obezbojenosti i opet boja već bez zagrijavanja u drugoj boji. Kao rezultat toga, ILO je prilično lako otkriti, kao što su boje prvo bojanje i dobar stand out.

Notepad phtihijatričara - tuberkuloze

Sve što želiš znati o tuberkulozi

Ispitivanja krvi i urina za tuberkulozu

VA Koshechkin, Z.A. Ivanova

Elementi crvene krvi, u pravilu, male promjene u tuberkulozi. Tek nakon akutnog gubitka krvi iz pluća ili crijeva može doći do anemije. Blago smanjenje razine hemoglobina može se vidjeti u kroničnim oblicima fibrous-kavernozne plućne tuberkuloze.

Jedan pokazatelj tuberkulozan aktivnosti procesa je ESR (taloženja eritrocita stopa). Ubrzana ESR korelaciji ne samo s duljinom trenutne aktivnosti i svježe procesa, ali i pogoršanja kroničnih, osobito fibrocavernous, procesima.

Elementi leukocitne frakcije krvi aktivnije reagiraju na tuberkulozu.
Konvencionalno, postoje tri faze promjena u leukocitnoj frakciji krvi, povezane s prirodom lezija u plućnoj tuberkulozi.
1. Neutrofilna faza borbe. U krvi se povećava udio neutrofila, što rezultira pomakom formule lijevo. Odsutni su eozinofili, smanjen je broj limfocita i monocita.
2. Monocitna faza - Prevladavanje infekcije. U krvi se povećava broj limfocita, krvna formula je pomaknuta lijevo, broj neutrofila je smanjen, detektiraju se pojedinačni eozinofili.
3. Faza obnavljanja. Povećan je udio limfocita i eozinofila. Krvni broj postupno se normalizira.
Ova odvajanja faza odražava samo ukupnu reakciju na krv.

Nuklearni pomak neutrofila u tuberkulozi
Osim kvantitativne, neutrofilna skupina ima kvalitativnu karakteristiku, koja je znatno mlađa i ranije označava različite patološke procese.

Tuberkuloza odraslih obično je sekundarni proces, najčešće uzrokuje samo krv u povećanju neutrofila. Kada se izražava inflitrativni oblike i plućna tkiva pluća propadanja pojava neutrofili pomak lijevo je sasvim jasno detektiraju i mogu doseći 20-30% ubod.

Plućni infiltrat se ne raspada, a fokalni oblici tuberkuloze tijekom prve detekcije ili pogoršanja na subfebrilnoj temperaturi i slabo izraženi funkcionalni poremećaji daju manje izraženu promjenu. Istovremeno, preostali elementi hemograma uopće ne mogu otkriti abnormalnosti. Stoga je temeljito određivanje nuklearne smjene osobito važno kod tuberkuloze.

Doktrina nuklearnog pomaka neutrofila napredovala je Arnet (1905) na temelju proučavanja krvi u raznim infekcijama, uključujući tuberkulozu.

Izrađujući naporne izračune s brojnim skicama, Arnet je primijetio određenu regularnost u konfiguraciji neutrofilnih jezgri.

Krv zdrave osobe sadrži:

  • 5% neutrofila s nerazrijeđenim vratom, neelegmentirana jezgra (1. razred);
  • 35% neutrofila s dva segmenta povezana končanicom kao konstrikcija (klasa II);
  • 41% neutrofila s tri segmenta (razina III);
  • 17% neutrofila s četiri segmenta (IV. Stupanj);
  • 2% neutrofila s pet segmenata (V klasa).

Uz segmentaciju kernela, Arnet je također uzela u obzir njegov oblik. Dakle, za prvu klasu izdvojio je nekoliko podklasa o stupnju depresije ne-segmentirane jezgre. Preostale klase podijeljene su u podrazrede ovisno o obliku segmenata.

Kada su infekcije proporcionalne njihovoj težini, broj multi-segmentiranih oblika se smanjuje, povećava se broj niskosegmentiranih (2-3 segmenata) i ne segmentiranih (relativno mladih stanica).

U Arnet shemi, broj ne-segmentiranih neutrofila klase I je prikazan na lijevoj strani; desno je broj ćelija klase II, zatim klase III itd. Zbog toga, s porastom ne segmentiranih i blago segmentiranih oblika, povećava se broj ćelija na lijevoj strani kruga i dolazi do "lijeve promjene".

urina
Izlučivanje mokraćnog mjehura u bolesnika s tuberkulozom gotovo je normalno. Patološke promjene u mokraći mogu biti ako tuberkuloza utječe na bubrege ili urinarni trakt.
Pacijenti s kroničnim oblicima plućne tuberkuloze ili kostiju mogu imati znakove amiloidoze.

3.7 Analiza krvi i urina.

Elementi crvene krvi, u pravilu, malo se mijenjaju s tuberkulozom. Tek nakon akutnog gubitka krvi iz pluća ili crijeva može doći do anemije. Blago smanjenje razine hemoglobina može se vidjeti u kroničnim oblicima fibrous-kavernozne plućne tuberkuloze. Jedan od pokazatelja aktivnosti tuberkuloze je ESR (sedimentacijska stopa eritrocita). Ubrzana ESR korelira ne samo s aktivnošću i opsegom trenutnog svježeg procesa, već s pogoršanjem kroničnih, posebno vlaknastih kavernoznih procesa. Elementi leukocitne frakcije krvi reagiraju aktivnije u proces tuberkuloze.

Konvencionalno, tri faze promjena u leukocitnoj frakciji krvi povezane su s prirodom lezija u plućnoj tuberkulozi:

  1. Neutrofilna - faza borbe. U krvi se povećava udio neutrofila, što rezultira pomakom krvne formule lijevo. Odsutni su eozinofili, smanjen je broj limfocita i monocita. Limfopenija je karakteristična za progresivne oblike tuberkuloze.
  2. Faza monocita je prevladavanje infekcije. U krvi se povećava broj limfocita, krvna formula je pomaknuta lijevo, broj neutrofila je smanjen, detektiraju se pojedinačni eozinofili.
  3. Faza oporavka. Povećan je udio limfocita i eozinofila. Krvni broj postupno se normalizira.

Ova podjela u fazama odražava samo opće krvne reakcije koje ne odražavaju kompleksnost krvnih reakcija na kroničnu infekciju tuberkuloze.

Nuklearni pomak neutrofila u tuberkulozi.
Osim kvantitativne, neutrofilna skupina ima kvalitativnu karakteristiku, koja je znatno mlađa i ranije označava različite patološke procese. Tuberkuloza odraslih, obično nakon primarnog procesa, najčešće uzrokuje u krvi samo povećanje neutrofila. S izraženim infiltrativnim pneumonijskim oblicima iu fenomeni dezintegracije plućnog tkiva, pomicanje neutrofila na lijevo je prilično različito i može doseći do 20-30% uboda.

Plućni infiltrat bez dezintegracije i fokalni oblici tuberkuloze tijekom prve detekcije ili pogoršanja kod subfebrilne temperature i blagih funkcionalnih poremećaja daju manje izraženu promjenu. U ovom slučaju, preostali elementi hemograma uopće ne mogu davati odstupanja od norme. Stoga, temeljito određivanje nuklearnog pomaka daje dijagnostički značaj u tuberkulozi.
Nauka o nuklearnom pomicanju neutrofila uvela je Arneth na temelju proučavanja krvi za različite infekcije, a posebno za tuberkulozu. Izrađujući naporne izračune s brojnim skicama, Arnet je primijetio određenu regularnost u konfiguraciji neutrofilnih jezgri. U krvi zdrave osobe, neutrofili s nerazrijeđenim suženjima, nesegmentirana jezgra (klasa I) iznose 5%; neutrofila s dva segmenta pridružena filiformnim suženjem (klasa II), 35%, III klasa 41%, IV klasa 17% i V klasa 2%. Kada su infekcije proporcionalne njihovoj težini, broj brojnih segmentiranih oblika se smanjuje, povećava se broj malih segmenata (2-3 segmenata) i ne segmentiranih oblika. U shemi Arnet, broj ne-segmentiranih neutrofila napisan je s lijeve strane; desno je broj ćelija klase II, zatim klase III itd. Zbog toga, s porastom ne segmentiranih i malo segmentiranih oblika, povećava se broj ćelija na lijevoj strani kruga i dolazi do "lijeve promjene".

Znakovi procesa tuberkuloze, uz promjene u hemogramu, su hyponatremija. To je najkarakterističnija metabolička promjena. Uzrok hyponatremije je razvoj plućnog tkiva s tuberkulozom pomoću antidiuretičke hormonske supstance. Posebno intenzivno, ta se tvar proizvodi tijekom razdoblja široko rasprostranjenih koleševnih oblika.

Analiza mokraće.
Izlučivanje urina u bolesnika s tuberkulozom gotovo je normalno. Patološke promjene u mokraći mogu biti ako tuberkuloza utječe na bubrege ili urinarni trakt. U urinu se nalaze proteini, bijele krvne stanice, MBT. U bolesnika s kroničnim oblicima plućne tuberkuloze ili kostiju, mogu se identificirati znakovi amiloidoze (uporni preteinurija, makroematuracija).

Dijagnoza tuberkuloze analizom krvi i urina

Elementi crvene krvi, u pravilu, malo se mijenjaju s tuberkulozom. Tek nakon akutnog gubitka krvi iz pluća ili crijeva može doći do anemije. Blago smanjenje razine hemoglobina može se vidjeti u kroničnim oblicima fibro-kavernozne plućne tuberkuloze.

Jedan pokazatelj tuberkulozan aktivnosti procesa je ESR (taloženja eritrocita stopa). Ubrzana ESR korelira ne samo s aktivnošću i opsegom trenutnog svježeg procesa, nego s pogoršanjem kroničnih, posebno fibro-kavernoznih procesa.

Elementi leukocitne frakcije krvi reagiraju aktivnije u proces tuberkuloze.

Konvencionalno, postoje tri faze promjena u leukocitnoj frakciji krvi, povezane s prirodom lezija u plućnoj tuberkulozi.

  1. Nefrofilna faza borbe. U krvi se povećava udio neutrofila, što rezultira pomakom formule lijevo. Odsutni su eozinofili, smanjen je broj limfocita i monocita.
  2. Faza monocita je prevladavanje infekcije. U krvi se povećava broj limfocita, krvna formula je pomaknuta lijevo, broj neutrofila je smanjen, detektiraju se pojedinačni eozinofili.
  3. Faza oporavka. Povećan je udio limfocita i eozinofila. Krvni broj postupno se normalizira.

Ova odvajanja faza odražava samo ukupnu reakciju na krv.

Nuklearni pomak neutrofila u tuberkulozi

Osim kvantitativne, neutrofilna skupina ima kvalitativnu karakteristiku, koja je znatno mlađa i ranije označava različite patološke procese.

Tuberkuloza odraslih obično je sekundarni proces, najčešće uzrokuje samo krv u povećanju neutrofila. Kada se izražava inflitrativni oblike i plućna tkiva pluća propadanja pojava neutrofili pomak lijevo je sasvim jasno detektiraju i mogu doseći 20-30% ubod.

Plućni infiltrat se ne raspada, a fokalni oblici tuberkuloze tijekom prve detekcije ili pogoršanja na subfebrilnoj temperaturi i slabo izraženi funkcionalni poremećaji daju manje izraženu promjenu. Istovremeno, preostali elementi hemograma uopće ne mogu otkriti abnormalnosti. Stoga je temeljito određivanje nuklearne smjene osobito važno kod tuberkuloze.

Doktrina nuklearnog pomaka neutrofila napredovala je Arnet (1905) na temelju proučavanja krvi u raznim infekcijama, uključujući tuberkulozu.

Izrađujući naporne izračune s brojnim skicama, Arnet je primijetio određenu regularnost u konfiguraciji neutrofilnih jezgri. Krv zdrave osobe sadrži:

  • 5% neutrofila s nerazrijeđenim vratom, neelegmentirana jezgra (1. razred);
  • 35% neutrofila s dva segmenta povezana končanicom kao konstrikcija (klasa II);
  • 41% neutrofila s tri segmenta (razina III);
  • 17% neutrofila s četiri segmenta (IV. Stupanj);
  • 2% neutrofila s pet segmenata (V klasa).

Uz segmentaciju kernela, Arnet je također uzela u obzir njegov oblik. Dakle, za klasu je izdvojio nekoliko podrazreda o stupnju depresije ne-segmentirane jezgre. Preostale klase podijeljene su u podrazrede ovisno o obliku segmenata.

Kada su infekcije proporcionalne njihovoj težini, broj multi-segmentiranih oblika se smanjuje, povećava se broj niskosegmentiranih (2-3 segmenata) i ne segmentiranih (relativno mladih stanica). U Arnet shemi, broj ne-segmentiranih neutrofila klase I prikazan je slijeva; desno je broj ćelija klase II, zatim klase III itd. Zbog toga, s porastom ne segmentiranih i blago segmentiranih oblika, povećava se broj ćelija na lijevoj strani kruga i dolazi do "lijeve promjene".

urina

Izlučivanje mokraćnog mjehura u bolesnika s tuberkulozom gotovo je normalno. Patološke promjene u mokraći mogu biti ako tuberkuloza utječe na bubrege ili urinarni trakt.

Pacijenti s kroničnim oblicima plućne tuberkuloze ili kostiju mogu imati znakove amiloidoze.

35. Dijagnostička vrijednost studije krvi i urina kod bolesnika s tuberkulozom.

Ispitivanje krvi Hemoglobin i eritrociti u većini slučajeva ostaju nepromijenjeni, osim u slučajevima s akutnim gubitkom krvi. Indikator koji svjedoči o prisutnosti aktivnog tuberkularnog procesa je brzina sedimentacije eritrocita. Ubrzana ESR je karakteristična ne samo za svježu aktivnu tuberkulozu, već i za pogoršanje kroničnog procesa. Preostali parametri ispitivanja krvi razlikuju se u velikoj mjeri ovisno o prirodi oštećenja pluća. Promjene u perifernim parametrima. krv s tuberkom. no specifičnost, međutim, hemogram pomaže dijagnostici. fazi bubrega. proces i procjenu težine. njegov protok. Ljudi koji su bili ispitani za tuberkulozu i pacijente s tuberkulozom. dodijeljena je obscheklin. test krvi s definicijom ESR, koji sadrži eterr. i leukemije, koncentraciju hemoglobina i brojanje leukocitne formule. Preporučuju se pacijenti s tuberkulozom u prisustvu pijete. za određivanje broja retikulocita za procjenu regenerata. sposobnost koštane srži, u diferencijalno-dijagnostičkim slučajevima - sadržaj trombocita. Promjene u hematologu. pokazatelji ovise, s jedne strane, o lokalizaciji, prirodi i ozbiljnosti inf. proces, s druge strane - o stanju organizma, njegove kompenzacijske rezerve. Hemogram har. nego faza procesa od klina. oblikovati. Na primjer, kod bolesnika s raširenim destruktivnim oblicima tuberkuloze, uz naknadu za proces i odsutnost svježih upala. promjene u uzorku krvi mogu biti norma. Ispiranje cijevi. proces obično prati izbodeni promjena neutrofila, limfopenija i porast ESR-a. Tot. broj bijelih krvnih stanica. većina pacijenata je unutar normalnih granica. Samo akutni i teški tijek karakterizira povećanje sadržaja leukocita u krvi na 15 x 109 / L. Neutrofilni pomak leukocitne formule lijevo postaje sve značajniji. S težinom bolesti (osobito s miliarskom tuberkulozom) može doći do leukemoidne reakcije mijeloidnog tipa. Cupping akutnog procesa uzrokuje normalizaciju naznačenih promjena, izgled limfocitoze. Neutropenija i limfocitoza mogu se promatrati u kroničnoj hematogenoj diseminiranoj i fokalnoj tuberkulozi.

urina. U analizi urina u bolesnika s plućnom tuberkulozom, nema primjetnih abnormalnosti. Promjene se pojavljuju samo s tuberkuloznim lezijama bubrega i mokraćnog sustava. Rutinska analiza urina za tuberkulozu neophodna je ne samo u slučaju sumnje na oštećenje bubrega. U drugom. on je jedini. za ranu dijagnozu. Postojana prisutnost gnojova u mokraći i, najvažnije, tuba. bakterije, naravno, ukazuju na cijev. bubrega. Međutim, ponekad je to potrebno. Issled. urina za otkrivanje patologa. Nalazi; tako za neke. oblike tuberkuloze. mjesečna analiza urina (diseminirani oblici, komplicirani primarni kompleks). Male promjene u mokraći u obliku tragova proteina, single. leukociti i svježi eritrociti mogu se povremeno detektirati kao fenomen opće intoksikacije. Konačno, neke reakcije s urinom daju indikator ozbiljnosti postupka. Među njima je i pojava diazorne reakcije u generalizacijama. oblike tuberkuloze, osobito s miliarskom tuberkulozom.

Bez sumnje, prognostička vrijednost tijekom tuberkuloze ima urohromogeni učinak. Vrlo je jednostavno i to je njegova velika prednost. Ona proizv. oznaka. način: uzeti filtrirani urin i razrijediti ga 10 puta. Sipa u dvije cijevi, jedna je kontrola i dodao na drugu otopinu kalijeva permanganata 1: 1000 Ako je pozitivan odgovor se dobiva in vitro oštrim kanarinac bojenja koji je otkrio vrlo jasno u usporedbi s kontrolom. Potrebno je uzeti u obzir samo dobro izražene. u boji. Reakcijski mehanizam je da kalijev permanganat oksidira bezbojni urohromogen u urinu, što je značajno povećano s progresivnom tuberkulozom.

Koje su testovi za plućnu tuberkulozu?

Svi pacijenti dobivaju laboratorijske testove. Budući da je patologija zarazna drugima, pravodobno istraživanje biološkog materijala pridonosi točnosti u dijagnozi i pomaže u praćenju tijeka liječenja.

Popis laboratorijskih testova za plućnu tuberkulozu

Popis testova za tuberkulozu

Popis obveznih testova za plućnu tuberkulozu je sljedeći:

  • ispljuvak - u njemu se nalaze špilje, rižino tijelo, protein, elastična vlakna, kalcijeve soli;
  • analiza eksudata - pokazuje neutrofile i endotelne stanice s prevladavanjem leukocita;
  • analiza bronhoalveolarnog ispiranja To ukazuje na smanjenu količinu alveolarnih makrofaga s naglog povećanja neutrofila s aktivnom tuberkulozom tijekom procesa, a ako se tijekom mjerenja spavanja makrofagi malo porastao;
  • serološki testovi, ili enzimski imunoanalizu, za određivanje serumskih imunoglobulina za mikobakterijske antigene. Omjer dijagnostičkog titra antitijela prema uzročniku bolesti nadilazi vrijednost 1: 8.

Što pokazuju rezultati testa krvi?

S obzirom na biokemijske analize krvi u plućne tuberkuloze stručnjaci imaju priliku utvrditi promjene orijentacije i proteina i njegove frakcije u serumu. To određuje oblik i stupanj bolesti. Prekoračene su razine mokraćne kiseline, bakra, kolesterola i lizozima. Uočena je aktivnost kreatin-kinaze i angiotenzin-konvertirajućeg enzima. Zbog nižeg pH i povišenog pCO2, razvija se respiratorna acidoza.

Što se tiče parametara hemoglobina, njihovo smanjenje, što dovodi do razvoja anemije, nije tipično za proces tuberkuloze.

Analiza urina kod tuberkuloznih bolesnika

Je li test urina za plućnu tuberkulozu?

Izlučivanje urina u tuberkuloznih bolesnika ostaje normalno. Patološke promjene obično se javljaju kada su bubrezi i mokraćni putovi uključeni u proces tuberkuloze. U bolesnika s kroničnom bolešću, tijekom ispitivanja mogu se otkriti znakovi amiloidoze.

Što pokazuje analizu urina u plućnoj tuberkulozi, koje informacije mogu ukazivati ​​na razvoj patološkog procesa u tijelu?

  1. Gustoća je 1.015 - 1.025.
  2. Jedina prisutnost crvenih krvnih stanica je dopuštena, u djece - ne više od 5.
  3. Leukociti ne bi smjeli biti više od 2 jedinice, za žene i djevojke - do 5 jedinica.
  4. Vrijednosti soli ne smiju biti značajne.
  5. Dopuštena vrijednost ravnog epitela je do 5 jedinica.

Što će pokazati test krvi za plućnu tuberkulozu

Tuberkuloza je opasna i složena bolest u liječenju. Učinkovitost liječenja ovisi o tome kako je pravovremeno otkriveno. Nitko nije imun na infekcije, apsolutno se svatko može razboljeti - odrasle osobe, djeca, starije osobe.

U nedostatku potrebnog pravodobnog liječenja zatvorenog oblika ide u opasno otvoreno, stoga je dijagnostika u ranoj fazi bolesti vrlo važna, a to se može postići redovitim i sveobuhvatnim anketama.

U ovom ćemo članku razmotriti različite metode za dijagnosticiranje ove plućne bolesti, te pokušati odrediti koji test krvi za plućnu tuberkulozu je najpouzdaniji i informativniji.

Kada postoji potreba za provjerom tuberkuloze

Dakle, anketa je neophodna kada:

  • kontakte s nositeljima bolesti;
  • opća slabost;
  • smanjenje težine;
  • porast temperature u večernjim satima;
  • kronični kašalj.

Posebno je važno utvrditi prisutnost tuberkuloze u djetinjstvu u pravodobno, jer je vrlo vjerojatno u djece da infekcija uzrokuje dalje patoloških procesa u tijelu.

Važno! Jedna od preventivnih mjera je BCG cijepljenje na 4 dana život dijete i u 7-godišnjak godine. Tijelo djeteta je slabije od odrasle osobe pa je važno zaštititi ga od infekcije i cijepljenja.

Studije o sumnji na tuberkulozu

Tuberkuloza se može identificirati na nekoliko načina.


Slika 1. Fragment rendgenske snimke prsa bolesnika s tuberkulozom. Fluorografija je jedna od najpouzdanijih metoda dijagnosticiranja ove bolesti, ali je najučinkovitija u odjeljku s drugima. Na primjer, detaljan krvni test pokazat će tuberkulozu čak iu ranoj fazi.

  1. Ispitivanje rendgenskim zrakama.Procjena stupnja oštećenja pluća pomoći će fluorografiji. Međutim, treba imati na umu da početne faze razvoja bolesti neće biti vidljive na X-zraku. Pregled bi trebao biti sveobuhvatan. Za potpuniji pregled, pacijentova pluća moraju biti fotografirana i od prednje i straga.
  2. Tuberkulinski test. U ispitivanju djece najčešće se koristi tuberkulinski test (Mantouxova reakcija). Tuberkulin je mješavina bjelančevina izoliranih iz mrtvih patogena. Uvođenje lijeka pod kožu uzrokuje reakciju imuniteta, koja se manifestira na različite načine. Ako u tijelu nema patogena, tada će par dana nakon injekcije biti jedva vidljivi trag. Ako je mjesto ubrizgavanja uzorka ili nastanak ulcera upaljena, vjerojatnost zaraze pacijenta je visoka.

Važno! Mantouxova reakcija ne omogućuje utvrđivanje prisutnosti tuberkuloze s 100% vjerojatnosti, ali će pomoći u određivanju rizične skupine za tu bolest. S oprezom valja iskušati one koji pate od alergija. Uvođenje sastava tijela može reagirati na nepredvidljiv način.

  1. studijaurini krvi. Rezultati pomažu otkriti tragove patogena. Dodijeljena je za utvrđivanje konačne dijagnoze i opsega bolesti.
  2. strukturaispljuvak. Prisutnost mycobacterium tuberculosis omogućuje određivanje i proučavanje iskašljaja. Materijal pokazuje višak normi proteina koji ga razlikuje od bronhijalnog iskašljaja, kao i patogena infekcije.

Je li moguće odrediti tuberkulozu općim testom krvi

struktura eritrociti (crvene stanice) u prisutnosti bakterija varira neznatno. Izazvati akutne crijevne ili plućne hemoragije anemija, značajan snižavanje hemoglobina.

Postoje ljudi koji sumnjaju da li se tuberkuloza može odrediti analizom krvi. U stvari, opća analiza može identificirati razvojne upalne i patološke procese u tijelu povećana stopa ESR. Povećani indeks ukazuje ne samo na aktivnost i trajanje tekuće upale, već i na pogoršanje kronične bolesti, posebno u posljednjoj fazi bolesti.


Slika 2. Liječnik provodi postupak prikupljanja krvi iz pacijentove vene pomoću štrcaljke. Nakon toga će se provesti krvni test, s tuberkulozom čiji indikatori upućuju na upalne procese.

Važno! Razina ESR-a može se zbuniti s indikatorima upale ili raka pluća. U ovom slučaju potrebno je istražiti broj eozinofila (jedna od vrsta leukocita). Ako se eozinofili povećaju, a leukocitna formula pokazuje iznenadne promjene u testu krvi, to se događa kod tuberkuloze, a isključena je od upale pluća.

Jesu li klinički i biokemijski krvni testovi točni?

Klinički krvni test za plućnu tuberkulozu često nije dovoljan za dijagnosticiranje tuberculus bacil. Tada je potrebno daljnje sveobuhvatno ispitivanje. Isto se može reći io biokemijskom testu krvi. Kod tuberkuloze početne faze ili latentnog oblika, najvjerojatnije neće pokazivati ​​nikakve abnormalnosti. I samo s akutnim oblicima bolesti koeficijent albumin-globulin u njemu će se spustiti.

Vrste krvnih testova za protutijela na tuberkulozu

Postoje točnije, dublje od OAK, metode testiranja krvi, čime se identificiraju tuberkuloza. Kako odrediti takve pretrage krvi, imate li bolest, dalje ćemo razmotriti.

Postavljanje objektivne dijagnoze je moguće uz primjenu pristupa lančana reakcija polimeraze (PCR) i enzimski imunoanalizu (ELISA).

Pokazuje li ELISA prisutnost tuberkuloze?

Uz pomoć IFA otkriva prisutnost patogena u pacijenta. Metoda je prikladna, jer vam omogućuje istodobno ispitivanje velikog broja uzoraka. Međutim, ona ima nisku osjetljivost i preporučuje se za uporabu u područjima s niskom stopom incidencije.

Koje promjene otkriva PCR metoda?

način PCR odnosi se na najviše produktivne. Koristi se za otkrivanje bolesti, određivanje ozbiljnosti i remisije u liječenju pronalaženjem DNA mikrobakterija.

PCR se koristi za:

  • otkrivanje progresivnog uboda Kocha;
  • test za otkrivanje extrapulmonalne tuberkuloze;
  • brzo uspostava žarišta lokalizacije infekcije;
  • dijagnoza ponovnog pojavljivanja bolesti;
  • praćenje tijeka liječenja.

A to i još jedan test krvi za antitijela na tuberkulozu smatra se dovoljno pouzdanim. Ali postoje i drugi.

Alternativne metode testiranja krvi

Manje od PCR i ELISA je uobičajeno za otkrivanje patogene mikrobakterijske metode Ispitivanje otpuštanja interferona u gammi. Može se izvesti umjesto tuberkulinskog testa. Reakcija pokazuje formiranje gamma-interferona kao odgovor na uvođenje mikrobakterija. Rezultati mogu točno odrediti prisutnost infekcije.

Druga alternativna metoda istraživanja jest QuantiFERON-TB Gold. Ova metoda se najčešće koristi za testiranje djece koja imaju teške alergijske reakcije na tuberkulinski test.

Važno! Obje metode ne dopuštaju određivanje stupnja razvoja infekcije - aktivni ili latentni.

Liječnik koji je pohađao određuje koji će se tip krvnog testa koristiti. Najčešće, studija se provodi na složen način. Analiza krvi u latentnom obliku tuberkuloze općenito ne može dati rezultate.

Kako su dekodirani rezultati testa krvi?

Pri tumačenju općeg testiranja krvi vrijedi obratiti pažnju na razinu ESR, hemoglobina, leukocita.

Razina ESR-a zdrava osoba će imati manje od 50 jedinica, višak ovog pokazatelja ukazuje na upalni proces u tijelu.

Broj leukocita u krvi dosegne pacijent s tuberkulozom 6 u 10 9 / litri, u akutnim i teškim slučajevima bolesti - 12-15 do 10 9 / L.

Sastav crvenih krvnih stanica većina pacijenata ostaje normalna. Nizak hemoglobin je fiksiran militarnom tuberkulozom, slučajnom upalom pluća.

Akutni, progresivni i komplicirani oblici bolesti se mijenjaju leukogram. U nekim slučajevima umjerena leukocitozado 10.000-15.000 bijelih krvnih stanica), rjeđe leukopenija.

Koji god test krvi za plućnu tuberkulozu obavlja, njihovo dešifriranje je djelo iskusnih stručnjaka. Samo oni mogu točno odrediti koliko se tuberkuloza pokreće, ako se pronađe. Analize ELISA i PCR dešifrirane su isto. Kod posebnih oblika, negativan ili pozitivan rezultat označen je suprotno otkrivenoj infekciji.

Vrste analiza za liječenje

Teškoća liječenja je da infekcija može postati stabilan na bilo koju vrstu antibiotika, posebno u naprednim fazama, kao i dugoročno razdoblje inkubacije, tijekom kojih nije moguće utvrditi zarazu.

Nakon identificiranja i propisivanja odgovarajuće terapije, proces oporavka se prati u redovitim intervalima 1-2 puta mjesečno. Pacijent daje krv i sluznicu.


Slika 3. Medicinski stol u ordinaciji poslije sputuma prikupljen od pacijenta. Uzorci sputuma nalaze se u plastičnim epruvetama i čekaju laboratorijska ispitivanja.

Opći test krvi, Mantoux test, fluorografija se može obaviti u gotovo svim medicinskim centrima, to se odmah događa ako dođe do sumnje. Na temelju nalaza, terapeut će donijeti zaključak o odsutnosti patoloških promjena u tijelu ili davati upute za daljnje preglede u TB-ovoj ambulanti.

Specijalizirane i točnije studije provode se u TB ambulante, koji su opremljeni laboratorijima i potrebnim reagensima za istraživanje.

Dakle, sumirajući gore:

  • tuberkuloza opasna bolest, što je izuzetno važno za otkrivanje na vrijeme;
  • povećana ESR, Raspad u plućima, promjena leukograma dati osnovu za slanje pacijenta na daljnje ispitivanje kako bi se identificirala infekcija;
  • liječenje se provodi uz pomoć: antituberkulozni lijekovi; Intenzivna faza liječenja nastavlja se do postizanja pozitivne dinamike kliničkih i radioloških indeksa.

Korisni videozapis

Nudimo gledanje videozapisa koji također odgovara na pitanje je li moguće identificirati tuberkulozu analizom krvi. Ona opisuje detaljnije kvantiferon testnom QuantiFERON TB Gold, što pokazuje analiza krvi tuberkuloze imunološkog odgovora.

Dekodiranje općeg testa krvi za tuberkulozu kod odraslih i djece

Infekcija tuberkulozom bacilom više nije kazna za osobu. Suvremena medicina koristi učinkovite alate za borbu protiv ove bolesti, ako je otkrivena u ranoj fazi. U vrijeme otkrivanja patologije pomoći se redovitim preventivnim pregledima i testovima, uključujući opći test krvi za tuberkulozu.

Promjena u kliničkoj slici

Ukupni test krvi za plućnu tuberkulozu (UAC) nema specifičnih manifestacija. Označava li se o razvoju tuberkuloze i određivanju stanja bolesti, ne postoji. No, za nespecifične simptome, može se procijeniti skriveni upalni proces i sumnjivih promjena u plućima.

Odstupanje eritrocita od normalne

S tromim oblikom ili lokaliziranom lezijom broj crvenih krvnih zrnaca u krvi se ne mijenja, ali se njihova boja mijenja. Razina hemoglobina u crvenim krvnim stanicama se smanjuje. Ovo stanje se zove hipokromija.

Uz značajne infiltrativne lezije plućnog tkiva, klinički krvni test pokazuje smanjenje broja crvenih krvnih stanica, što je smanjenje njihove veličine. Pojavljuju se nezrele stanice - retikulociti, koji su "prekursori" crvenih krvnih stanica. U početnoj fazi tuberkuloze, količina retikulocita ne prelazi 0,5%.

Teška anemija je češća kod odraslih osoba s naprednim oblikom tuberkuloze. U tom slučaju broj retikulocita povećava se do 1% ukupnog broja crvenih krvnih stanica.

Zamjena leukocitne formule

Leukociti kao stanice imunološkog sustava su uključeni kao odgovor na bolest na prvom mjestu. Opća analiza krvi i proučavanje leukograma određuju prisutnost upalnog procesa i njegove faze.

U nekompliciranom zatvorenom obliku, postoji značajan porast broja neutrofila - bijelih krvnih stanica odgovornih za borbu protiv bakterijske infekcije. Pojavljuju se promyelocite - nezrelene leukocitne stanice, koje se normalno ne pojavljuju.

Produljena, teška plućna tuberkuloza popraćena je degenerativnim promjenama neutrofila, stvaranjem patoloških granularnosti. Broj eozinofila naglo se smanjuje. Zabilježena je limfopenija - smanjenje broja limfocita. Svi ti znakovi upućuju na produženi upalni proces, praćen nastankom gnoja i nekrotičnih masa.

Promjena u ESR-u

Za određivanje tuberkuloze u svojoj aktivnoj fazi pomaže ESR - pokazatelj brzine sedimentacije eritrocita. Ponderiranje crvenih stanica i njihovo brzo taloženje olakšano je prianjanjem imunoglobulina, fibrinogena. Obično, ove razine krvi kod muškaraca ne prelaze 10 mm / h, kod žena - 15 mm / h. Ubrzanje ESR do 80 mm / h ukazuje na aktivaciju upalnog procesa u tijelu.

Značajke pokazatelja u djece

Analiza krvi za tuberkulozu kod djeteta ne razlikuje se od promjena u odrasloj dobi. Dekodiranje rezultata se provodi za iste pokazatelje:

  • U početnoj fazi bolesti, eritrocita se mijenja beznačajno. Anemija se može otkriti samo kada je oblik destruktivan. U drugim slučajevima, broj crvenih krvnih stanica ostaje nepromijenjen, dok se postotak nezrelih eritrocita povećava. Sumnja se na tuberkulozu kod djece ako je otkriven retikulocit iznad 1 ppm.
  • Pokazivači leukocita također su u tijeku s promjenama. Razvija leukocitoza - povećanje ukupnog broja bijelih krvnih stanica zbog neutrofila, a broj limfocita je oštro smanjen. Prema normi za djecu stariju od 6 godina 40%, broj limfocita u tuberkulozi nije veći od 20%.

U ranoj fazi bolesti, broj eozinofila - stanice koje reagiraju na početak alergijske reakcije se povećavaju. Oštar pad znači da proces prelazi u aktivnu fazu.

  • U djetinjstvu ESR ne prelazi 10 mm / h. Ubrzanje do 50mm / h ukazuje na mobilizaciju obrambenih tijela u borbi protiv upalnog procesa.

Kod djeteta početna faza bolesti često nastaje bez očitih simptoma ili prikrivanja pod ARVI.

Promjene ovisno o stupnju bolesti

Je li moguće uspostaviti prisutnost fokusiranja tuberkuloze uz pomoć laboratorijskog krvnog testa? Nažalost ne. Opći test krvi za tuberkulozu može otkriti upalni proces samo u određenim stadijima bolesti.

  1. U fazi infiltracije, leukociti malo reagiraju, ESR se povećava.
  2. U fazi propadanja javljaju se značajne promjene u leukocitnoj formuli i eritrocitima.
  3. Diseminirani oblik tijekom analize donijet će izraženije gore spomenute odstupanja.
  4. Kada se upalni proces smiruje ili oporavi, crvena krv se vraća u normalu, broj i omjer leukocita se vraćaju.
  5. Neaktivan oblik plućne tuberkuloze u općem testu krvi nije detektiran.

Ključ za uspješno liječenje je rano otkrivanje tuberkuloze, a opći test krvi je metoda koja omogućuje otkrivanje pojave latentnog upalnog procesa u vremenu. I iako se analiza ne smatra specijaliziranom metodom istraživanja, može u kratkom vremenskom razdoblju imati veliku masu ljudi. Pri identificiranju abnormalnosti u tipičnoj kliničkoj slici dodjeljuje se specifična analiza za tuberkulozu i fluorografiju.

Tko je rekao da je nemoguće izliječiti tuberkulozu?

Imali ste dijagnozu s tuberkulozom. Ispunjavate sve liječničke recepte, ali nema oporavka. Iz pregršt pilule želudac boli, traži slabost i apatiju? Možda je vrijeme da promijenite svoj pristup liječenju.

Liječnici ne mogu prevladati uzrok bolesti. Pročitajte Eleninu priču, koja je uspjela poraziti tuberkulozu, bez obzira na sve. Pročitajte članak >>

Pokazatelji ESR u tuberkulozu

Trenutno, prema statistikama, tuberkuloza je najčešća bolest među ljudima. Najčešće ova bolest utječe na djecu i segmente populacije s niskim prihodima. Valja napomenuti da se svake godine udvostručuje postotak bolesnih ljudi. S tim u svezi se razvijaju novi lijekovi i metode za liječenje tuberkuloze.

Glavni čimbenik koji doprinosi razvoju tuberkuloze je smanjenje imuniteta, što može biti posljedica onečišćenja okoliša. Dijagnoza ove bolesti može se provesti uz pomoć testova i na mnoge druge načine.

Analiza krvi za tuberkulozu glavni je pokazatelj za određivanje bolesti kod ljudi. Tuberkuloza je opasna zarazna bolest. Važno je napomenuti da se u naprednijim fazama bolesti vrlo teško liječiti, tako da je važno uočiti bolest i započeti odgovarajuće liječenje u bolnici.

Načini ugovaranja tuberkuloze

Bolest ima mehanizam prijenosa kapljica zraka. Dakle, infekcija se može pojaviti kao rezultat dobivanja patogena u tijelo kroz sluznicu. Osim toga, tuberkuloza se može prenijeti od bolesne majke do fetusa u razvoju.

U gotovo svim slučajevima, tuberkuloza djeluje na dišni sustav. Udio izvanplućni bolest (koji utječu na probavni sustav, središnji živčani sustav, krši vizualnu funkciju, zglobove, genitourinarni sustav).

Glavni izvor bolesti je mycobacterium - Kochov štapić. To utječe na pluća, kožu, kosti i mnoge druge organe. U pravilu, tuberkuloza može dovesti do invaliditeta ili čak do smrti neke osobe. Međutim, ako se bolest dijagnosticira što ranije, onda je sasvim prikladno za liječenje.

Pokazatelji ESR u tuberkulozu

Krvni test za definiranje tuberkuloze pokazuje klinički tijek upalnog procesa. Normalno, stopa eritrocita sedimentacije je: kod muškaraca 1-10 mm / h, kod žena 2-15 mm / h.

Uzročnik, koji ulazi u ljudsko tijelo, uzrokuje oštećenje tkiva i organa različitih sustava. Uključujući mijenjanje pokazatelja krvi. Dakle, kada se inficira štapićem, primijećeno je vrlo snažno povećanje brzine sedimentacije eritrocita. Također se povećava broj bijelih krvnih zrnaca, jer upalni proces se odvija u tijelu.
Tuberkuloza u pravilu ne uzrokuje značajne promjene u eritrocitima. Razvoj male anemije i niskog hemoglobina može se razviti jedino s značajnim gubitkom krvi. Dakle, tuberkuloza je popraćena viškom ESR-a znatno višu od normalne vrijednosti.

simptomi

Glavni simptomi tuberkuloze su:

  1. Povećana tjelesna temperatura;
  2. Noćni znoj;
  3. Pojava kratkoće daha;
  4. Suhi, jaki kašalj s ispljuvakom (krvne pruge mogu biti prisutne);
  5. Opći umor;
  6. Oštar gubitak težine;
  7. Brzi zamor;
  8. pospanost;
  9. agresivnost;
  10. Nedostatak apetita;
  11. Bol u prsima.

Djeca, za razliku od odraslih, najviše su osjetljiva na infekciju tuberkuloze. Stoga je potrebno redovito ispitivati ​​svoje dijete i provesti test kako bi identificirali Kochovu štapiću. Pravodobna dijagnoza omogućuje postizanje pozitivnog rezultata bez ozbiljnih posljedica.

Neki ljudi imaju snažan imunološki sustav. U tom se slučaju simptomi bolesti pojavljuju tek u kasnim fazama. S oslabljenim imunitetom, znakovi se pojavljuju na samom početku bolesti.
Tuberkuloza se razvija polagano iu fazama:

  • Primarni oblik.
    Razvija odmah nakon infekcije. Glavni simptomi u ovoj fazi su proširenje limfnih čvorova.
  • Latentna (skrivena forma).
    Početak bolesti karakterizira nepostojanje simptoma. Nadalje, oni se manifestiraju u obliku specifičnog bol pri disanju ili kašlja, nedostatak apetita, pojačano znojenje, umor. Takav se oblik može smatrati ne-zaraznim.
  • Otvori obrazac.
    Najozbiljniji oblik bolesti. Za liječenje je potrebno zaštititi bolesnu osobu od drugih u zatvorenim medicinskim ustanovama. To je neophodno kako bi se osigurala sigurnost okolnih ljudi.
  • Sekundarni oblik.
    Opaženo je kao rezultat ponovljene infekcije.

Dijagnoza tuberkuloze

Detekcija bolesti je komplicirana zbog sličnosti prvog simptoma kroničnog bronhitisa. Vodeća uloga u dijagnozi tuberkuloze odvija se pravodobnim uzimanjem testova iz budućih pacijenata. Dakle, ako je pacijent osumnjičen za tuberkulozu, provodi se sputum. Da biste to učinili, ispljuvaju se tijekom dana i šalju u laboratorij za otkrivanje mikobakterija.

Valja istaknuti da dijagnoza tuberkuloze ima i druge metode za ispitivanje pacijenata.

Najučinkovitiji načini dijagnosticiranja bolesti su:

  1. B / x krvni test;
  2. Analiza mokraće;
  3. Analiza sputuma;
  4. Mantoux test, Pirke;
  5. CT (kompjutorska tomografija);
  6. Serološki pregled krvi (ELISA, PCR);
  7. bronhoskopija;
  8. biopsija;
  9. Pleuralna punkcija;
  10. rendgenski pregled prsnog koša;
  11. Fluoroskopija.

Treba napomenuti da tuberkuloza prati porast koncentracije kolesterola, lizozima, mokraćne kiseline i Cu u serumu. Na temelju toga, sve promjene u tuberkulozi mogu biti vrlo specifične.

Svaki oblik bolesti karakterizira protok, težina, dijagnoza i liječenje. Stoga, kada se pojave prvi simptomi, odmah se posavjetujte s liječnikom i ne liječite sami. Budući da samo možete pogoršati situaciju i pogoršati vaše stanje.

Trenutno, postoje mnogi lijekovi koji se učinkovito bore protiv uzročnika tuberkuloze. Vodeća uloga u oporavku osobe igra pravodobna dijagnoza i kompetentna terapija. Također, opće stanje pacijenta ovisi o procesu oporavka nakon bolesti. Dakle, ako se promatraju sve medicinske preporuke, rizik ponovne infekcije može se smanjiti.

Laboratorijska dijagnoza tuberkuloze

Tuberkuloza je bolest koja se lako dijagnosticira u suvremenim uvjetima i znanstvenim dostignućima. Laboratorijska dijagnoza tuberkuloze središnje je za druge dijagnostičke metode, a drugo samo za rentgenske metode istraživanja.

Kliničko ispitivanje krvi

U bolesnika s tuberkulozom, promjene u općoj analizi krvi nisu patognomonične. S ograničenim i neaktivnim oblicima tuberkuloze, eritrocit je hipokromni u normalnoj količini. Kad masivne infiltrati ili kazeozne upala pluća, dok je prevalencija kazeozne limfadenitisu, specifične crijevne lezije, kao i za velike plućnim ili postoperativnog krvarenja i bilješku erythropenia mikrocitoze, oligohromaziyu, polihromaziyu. Makrocitoza, a osobito puikilotsitoz se susreću mnogo rjeđe, obično s teškom anemijom. Broj retikulocita u koraku tuberculosis kompenzacijom u rasponu od 0,1 do 0,6%, a subcompensated - od 0,6 do 1,0% i 1% karakterizira dekompenzacije retikulocita.

Kada tuberkuloze u nekim slučajevima može doći do umjerenu leucocytosis (do 15 tisuća leukocita.), Manje zračenja, koje se javljaju u 2-7% bolesnika s ograničenim i jednostavan proces događa oblicima i na 12,5% - destruktivna i progresivne plućne tuberkuloze,

Najčešći pomak pojavljuje se u leukocitnoj formuli. Označite i relativnu i apsolutnu neutrofiliju, umjereni pomak leukocitne formule lijevo prije promijelocita. Mijelociti su vrlo rijetki u slučaju nekomplicirane tuberkuloze. Povećanje broja neutrofila s abnormalnim zrna u bolesnika haemogram TB uvijek ukazuje na trajanje postupka: u bolesnika s teškim tuberkuloze gotovo svi neutrofili sadrže abnormalne žita. Kada epidemija tuberkuloze prestane, nuklearni pomak relativno brzo pristupa normama. Patološka granularnost neutrofila obično traje dulje od ostalih promjena u hemogramu.

Sadržaj eozinofila u perifernoj krvi i ovisi o postupku i faznog alergijskih stanja organizma. Njihov broj smanji do aneozinofiliya u teškim i produljeno izbijanja bolesti i, s druge strane, kao što se povećava resorpciju infiltrata i pleuralnog izljeva, kao i rane oblike primarne tuberkuloze.

Većina oblika primarne tuberkuloze popraćena je limfopenijom koja se ponekad opaža niz godina, čak i nakon ožiljaka specifičnih promjena. Sekundarna tuberkuloza u fazi egzacerbacije, ovisno o težini postupka, može biti popraćena ili normalnim brojem limfocita ili limfopenije.

Ona zauzima posebno mjesto odlučujući brzinom taloženja eritrocita dodatne testove za procjenu tuberkulozan proces (ESR) koja ima vrijednost u procjeni procesa tuberkuloze protoka i upoznavanja njegovih aktivnih oblika. Povećanje ESR ukazuje na prisutnost patoloških procesa (infektivnih upala, septički gnojna, hemoblastosis, Hodgkin et al.) I govori o njegovoj težini, ali normalne razine ESR nije uvijek pokazuju odsutnost patologije. Ubrzanje sedimentacije eritrocita doprinose povećanju razina u krvi globulin, fibrinogen, kolesterola i smanjenje viskoznosti krvi. Sporo taloženja eritrocita karakteristika stanja popraćena haemoconcentration, povećava sadržaj albumina i žučnih kiselina.

Hemogram u bolesnika s tuberkulozom mijenja tijekom liječenja. Hematološke smjene nestaju brže, to je uspješnija terapijska intervencija. Međutim, valja imati na umu učinak na hemopoezu različitih antibakterijskih lijekova. Često uzrokuju eozinofiliju, u nekim slučajevima - leukocitozu, a češće leukopenija do agranulocitoze i limfoid-retikularne reakcije. Sustavna hematološka kontrola i ispravna analiza dobivenih podataka bitni su za procjenu kliničkog stanja pacijenta, dinamiku procesa i učinkovitosti korištene terapije.

Klinička analiza urina

Kod tuberkuloze mokraćnog sustava, analiza urina je glavna laboratorijska dijagnostička metoda. Možete gledati leukocyturia, eritrotsiturii, proteinurija, gipoizostenuriyu, mikobakteriuriyu tuberkuloze, nespecifičnih bakteriurije.

Leucocyturia - najčešći simptom tuberkuloze mokraćnog sustava prije kemoterapije i ne postoji specifičan samo u iznimnim slučajevima, kao što je potpuno brisanje lumen uretera. Nechyporenko Test (određivanje broja leukocita u 1 ml mokraće) pomaže da objektivnije procijeniti stupanj leukocyturia nefrotuberkuloze sa, te u nekim slučajevima to prepoznati u normalnom urina. No, moramo se sjetiti da leykotsitouriya može biti akutni i kronični pijelonefritis, cistitis, uretritis, kamenje u bubrezima i mokraćnih kanala.

Eritrotsiturii. kao i leukociturija. smatraju se jednim od najčešćih laboratorijskih znakova tuberkuloze genitourinarnog sustava. Učestalost hematurije ovisi o prevalenciji procesa, povećava se kada se proces razaranja tuberkuloze razvija u bubrezima. Eritrociturija bez leukociturija je tipičnija za rane stadije bubrežne tuberkuloze. Hematurija, koja prevladava nad leukociturija, važan je argument u korist bubrežne tuberkuloze u njegovoj diferencijaciji s nespecifičnim pijelonefritisom.

Biokemijski test krvi

Kod tuberkuloze, promjene u nekim biokemijskim parametrima ovise prvenstveno o fazi procesa, komplikacija i raznih popratnih bolesti. U bolesnika s neaktivnom tuberkulozom pluća i drugih organa, ukupne proteinske i proteinske frakcije krvnog seruma su nepromijenjene i određuju njihov normalan sadržaj.

U akutnim oblicima bolesti, kao i kod pogoršanja i napredovanja kroničnih oblika tuberkuloze, koeficijent albumin-globulin smanjuje se.

Bitno u procjeni funkcionalno stanje organskih oštećenja jetre i tuberkuloze i komplikacije je određivanje ukupnog serumskog i izravna bilirubin, AST (ACT), alanin aminotransferaze (ALT). Dinamičko određivanje razine aminotransferaza. bilirubina u liječenju tuberkuloznih bolesnika, osobito u teškim oblicima, - obvezno komponentu biokemijske ispitivanja bolesnika s tuberkulozom i provodi se na mjesečnoj osnovi.

Procjena funkcionalnog stanja bubrega uključuje određivanje serumskog kreatinina i izračunavanje brzine glomerularne filtracije prema Cockcroft-Gaultovoj formuli. Izračunavanje brzine glomerularne filtracije pomoću Rebergovog uzorka daje manje točne rezultate.

Glavni cilj dinamičkih biokemijskih istraživanja bolesnika s tuberkulozom je praćenje tijeka procesa, pravodobno otkrivanje nuspojava lijekova i adekvatna korekcija nastalih homeostaških poremećaja.

Primjena biokemijskih metoda istraživanja u izvanpulmonalnoj tuberkulozi

Najobojljiviji pokazatelj je sadržaj tuberkulostearne kiseline u biološkim tekućinama, ali njegova definicija je povezana s tehničkim poteškoćama (potreba za plinskom kromatografijom i masenom spektrometrijom).

Prospektivno mjerenje aktivnosti adenozin deaminaze - enzim, određen u tekućinama: sinovijalno, perikardijalno, ascitesno ili spinalno. Glavni proizvođači adenozin deaminaze su limfociti i monociti. Određivanje aktivnosti adenozin deaminaze u biološkim tekućinama olakšava dijagnozu tuberkuloznog synovitisa, tuberkuloze limfnih čvorova, tuberkuloznog meningitisa, tuberkuloznog serosita.

Neki biokemijski pokazatelji zbog njihove nespecifičnosti određeni su samo u biološkim tekućinama, blizu fokusa lezije. Izmjerite razinu pokazatelja kao odgovor na subkutanu ili intradermalnu injekciju tuberkulina (obično prije i 48 i 72 sata nakon toga). Nakon toga izračunava se stupanj povećanja razine marker (u%) u odnosu na početnu razinu.

Optimalno određivanje urina djelovanja organskog specifičnog enzima transamnidaze, čija se pojava zapaža kada su zahvaćeni bubrezi različite prirode. Proučavanje transamidinaze opravdano je samo pod uvjetima subkutane injekcije tuberkulina kako bi se pogoršalo lokalni upalni proces. Odredite aktivnost transamidina u mokraći u početku i 24-72 sata nakon uvođenja 50 TE tuberkulina. Povećanje fermentacije u 2 puta i više omogućava u 82% slučajeva razlikovanje aktivne tuberkuloze bubrega od pogoršanja kroničnog pijelonefritisa.

Kod tuberkuloze ženskih genitalnih organa, koncentracije haptoglobina i malonskog dialdehida u krvi određuju se u uvjetima provokativnog tuberkulinskog testa. Subkutano ubrizgavan tuberkulin u dozi od 50 TE i 72 sata kasnije izvršio je drugu biokemijsku studiju. U slučaju etiologije tuberkuloze, stupanj povećanja razine haptoglobina nije manji od 28%, a razina malondialdehida iznosi 39% ili više. Također se koristi određivanje aktivnosti adenozin deaminaze u peritonejskoj tekućini dobivenoj iz Douglasovog prostora. Punkta se preispituje 72 sata nakon intradermalne injekcije tuberkulina u dozama od 0,1 TE i 0,01 TE u projekciju unutarnjih genitalnih organa na prednjoj trbušnoj stijenki. U korist procesa tuberkuloze, povećanje aktivnosti adenozin deaminaze je 10% ili više u usporedbi s inicijalnom.

Kada se oku ponaša, ispitana je fokalna reakcija koja se javlja u oku kao odgovor na antigensku stimulaciju. Neželjeno je razviti izražen odgovor, uz smanjenje vizualnih funkcija. Budući da je procjena minimalnih žarišnih reakcija često teško, za objektivizaciju zaključka preporučuje se paralelno usmjeravanje i stupanj rasta krvnog seruma haptoglobina ili adenozin deaminaze.

Sve biokemijske studije treba provesti u kombinaciji s drugim metodama.

Istraživanje sustava koagulacije krvi

Relevantnost statusa istraživanja sustava zgrušavanja krvi tuberkuloze je uzrokovano prisustvom većeg broja pacijenata s plućne tuberkuloze hemoptiza ili plućnog krvarenja, kao i komplikacija hemocoagulation na kirurško liječenje tuberkuloze. Osim toga, naravno, odnose TB latentno teče intravaskularne hemocoagulation utječe na tijek bolesti i učinkovitosti kemoterapije.

U bolesnika s plućnom TB prevalencije eksudativni upale komponente promatranog pada antikoagulacijskom krvi aktivnosti. Kod pacijenata s niskim raširenosti određenog lezije u plućima s prevlast produktivni hemocoagulation intravaskularne upalnom komponentom blago izražena. U bolesnika s plućnom tuberkulozom s hemoptiza i sistema zgrušavanja krvi plućna hemoragija državne razlikuje: u bolesnika s niskim gubitkom krvi na visini gemoptoe ili neposredno nakon njegovog prestanka je oštar porast u zgrušavanja krvi sposobnosti zbog teškog intenziviranje trombinoobrazovaniya zadržavajući povećan „strukturni” zgrušavanje. Kod pacijenata s velikim gubitkom krvi promatrana potencijal zgrušavanje smanjenje nauštrb snižavanje koncentracije fibrinogena. Aktivnost faktora XIII, broj trombocita. U fazi kirurškog zahvata u bolesnika s ograničenim oblicima plućne tuberkuloze sa značajnim povrede pojavljuje sustav homeostaze. Bolesnici s raširenom procesa u izvršavanju pnevmon- ili plevropnevmonektomii često razvijaju DIC, što može biti u obliku „drugu bolest.”

Da prati stanje koagulacije krvi u bolesnika s plućna tuberkuloza treba provesti određivanje aktivirano parcijalno tromboplastinsko vrijeme (aPTT), fibrinogen, trombinskog vremena, indeks protrombinsko vrijeme i krvarenja i vremena koagulacije.

Hormonalna istraživanja

Nedavni eksperimentalna i klinička opažanja ukazuju na prisutnost hormonalne promjene statusa u određenom tuberkulozan upale pluća. Dokazano je da se korekcija disfunkcije hipofize, nadbubrežne žlijezde hipofize-tiroidni sustava i funkciju gušterače u kombinaciji s anti-TB terapiju doprinose aktiviranje fibrogeneze i popravka na određeni upale lokusa.

Funkcionalno stanje sustava hipofize i štitnjače ocjenjuje se prema sadržaju trijodotironina u krvnom serumu (T3), tiroksina (T4), hormon koji stimulira štitnjaču tijela hipofize (TTG). Utvrđeno je da supklinička hipotireoza otkrivena je u 38-45% bolesnika s tuberkulozom pluća, a najčešće se s distribuiraju i fibro-kavernozan oblici procesa dijagnoze. S istim oblicima, razine kao T3,i T4, i postoji neravnoteža ovih hormona u obliku povećanja omjera T4/ Ta.

Nadbubrežne funkcije procijenjena je razina kortizola u krvnom serumu, i endokrine funkcije pankreasa - koncentracije imuno-reaktivni inzulin. U akutnoj fazi zarazne bolesti, povećava se potreba za endogenim kortizolom i inzulinom. Hiperinzulinemija također dokazuje inzulinsku otpornost tjelesnih tkiva, što je tipično za bilo koji aktivni upalni proces, naročito specifičan. Određivanje glyukokortiko idnoy-adrenalne funkcije s aktivnim plućne tuberkuloze otkriva prisutnost Cushing u većine bolesnika. Normalne razine koncentracije kortizola u krvi kod pacijenta s infektivnim upale u akutnoj perioda treba smatrati relativne neuspjeh glukokortikoidnog funkciju kore nadbubrežne žlijezde koji može služiti kao temelj za držanje doza odgovarajuću zamjensku terapiju glukokortikoida.

Gotovo trećina pacijenata s tuberkulozom pluća može se utvrditi da je razina Ince-lin imaju dosta nisko i blizu donje granice normale, dok je 13-20% doživjeli značajan hiperinzulinizma. I relativni hipo- i hiperinzulinizam su visoki čimbenici rizika za razvoj kršenja metabolizma ugljikohidrata u različitim stupnjevima. Ove promjene u funkcionalnu aktivnost gušterače B-stanica zahtijeva redovito praćenje glukoze u krvi u bolesnika s tuberkulozom i pravovremeno sprečavanje dijabetesa. Osim toga. ovo služi kao dodatno opravdanje za svrhovito korištenje fizioloških doza inzulina u složenoj terapiji tuberkuloze.

Općenito, niže razine hormona štitnjače i njihova neravnoteža hypercortisolemia i hiperinzulinizma najveći doseg u bolesnika s teškim tijekom tubercular procesa, s velikim oštećenja pluća i teške simptome tuberkuloze opijenosti.

Mikrobiološka dijagnoza tuberkuloze

Mikrobiološki studije su potrebne u identifikaciji bolesnika s tuberkulozom, verifikaciju dijagnoze, praćenje i korekciju kemoterapije ocjenjuju ishod liječenja, drugim riječima, od registracije tuberkuloze pacijenta prije nego je izvadite iz Registra.

Svi epidemiološki programi i projekti temelje se na procjeni broja bakterijskih excretora, što se ne može učiniti bez uporabe laboratorijskih metoda za detekciju mikobakterija tuberkuloze. U istraživanju takozvane neorganizirane populacije, postotak bakterijskih napadača doseže 70 ili više, što čini laboratorijske metode dovoljno učinkovito sredstvo za identificiranje bolesnika s tuberkulozom u ovoj populacijskoj skupini.

Tradicionalne mikrobiološke metode za dijagnosticiranje tuberkuloze su bakterioskopske i kulturne studije. Suvremene metode uzimaju u obzir uzgoj mycobacterium tuberculosis u automatiziranim sustavima, postavljanje PCR-a. Međutim, sve ove metode nužno se kombiniraju s klasičnim bakteriološkim metodama.

Prikupljanje dijagnostičkog materijala

Učinkovitost laboratorijskih istraživanja uvelike ovisi o kvaliteti dijagnostičkog materijala. Sukladnost s pravilima za prikupljanje, skladištenje i transport dijagnostičkog materijala i točna provedba algoritma za procjenu pacijenata izravno utječe na ishod i osigurava biološku sigurnost.

Za testiranje na tuberkulozu koriste se razni materijali. S obzirom na činjenicu da je TB logkih- najčešći oblik tuberkuloznih lezija, osnovni materijal za istraživanja u obzir ispljuvak i druge vrste odvojivim Traheobronhalno: gornjeg respiratornog sekreta trakta dobivene nakon inhalacije aerosola: bronhija ispiranja; bronhoalveolarne ispirke; materijal dobiven bronhoskopija, a intrapulmonalno transtracheal Biopsije bronhijalne aspirata, grkljana, obuću eksudata iz rane i mrlja al.

Učinkovitost istraživanja povećava se ako se provodi kontrolirana zbirka materijala od pacijenta. U tu svrhu dodjeljuje se posebno opremljena soba ili se kupuju posebne kabine. Zbirka materijala je opasna procedura, stoga je potrebno prikupiti materijal za istraživanje, pridržavajući se pravila zarazne sigurnosti.

Materijal za testiranje na mycobacterium tuberculosis sakupljen je u sterilnim bocama s čvrsto navijenim kapicama kako bi se spriječilo onečišćenje okoliša i zaštitilo prikupljeni materijal od onečišćenja.

Bočice za prikupljanje dijagnostičkog materijala moraju ispunjavati sljedeće uvjete:

  • mora biti izrađena od materijala otpornih na udarce;
  • treba lako rastopiti tijekom autoklaviranja;
  • biti dovoljno volumena (40-50 ml):
  • imaju široki otvor za prikupljanje sputuma (promjer ne manji od 30 mm);
  • biti lako rukovanje, prozirna ili prozirna, tako da možete procijeniti količinu i kvalitetu prikupljenog uzorka bez otvaranja poklopca.

Da bi se dobili optimalni rezultati istraživanja, moraju se pridržavati sljedećih uvjeta:

  • Prikupiti materijal prije početka kemoterapije;
  • materijal za ispitivanje mora se prikupiti prije jutarnjeg unosa hrane i lijekova;
  • za istraživanja poželjno je prikupiti barem 3 uzorka jutarnje sluzi. Prikupiti ispljuvak 3 uzastopna dana;
  • prikupljeni materijal mora se dostaviti u laboratorij što je prije moguće:
  • u slučaju kada je odmah nemoguće isporučiti materijal u laboratorij, pohranjuje se u hladnjak pri temperaturi zraka od 4 ° C ne više od 48 sati;
  • Pri transportu materijala potrebno je pažljivo pratiti integritet bočica.

Ispravno prikupljeni sputum je sluzav ili mukopurulentan. Optimalni volumen ispitivanog sputuma iznosi 3-5 ml.

Sputum se skuplja pod nadzorom liječnika. Osobe odgovorne za prikupljanje ispljušta trebaju slijediti provedbu određenih pravila:

  • potrebno je objasniti pacijentu svrhu studije i potrebu za kašlju ne slinom ili nazofaringealnom sluzi, već sadržaj dubokog dišnog trakta. To se može postići kao rezultat produktivnog kašlja koji se javlja nakon nekoliko (2-3) dubokih udisaja. Također je potrebno upozoriti pacijenta da treba isprati usta kuhana voda, ukloniti glavni dio mikroflore koji raste u usnoj šupljini i ostacima hrane koji ometaju ispitivanje sputuma;
  • medicinski radnik koji sudjeluje u prikupljanju sputuma, uz ogrtač i šešir, mora nositi masku, gumene rukavice i gumenu pregaču;
  • stoji iza pacijenta, preporuča se držati bocu što je moguće bliže ustima i odmah odvojiti ga sputum iskašljavanje, jer, tako da je potrebno osigurati da protok zraka usmjerava podalje od usluga zdravstvene zaštite:
  • Po dovršetku sputuma, zdravstveni djelatnik treba pažljivo zatvoriti bočicu s poklopcem i procijeniti količinu i kvalitetu prikupljenog sputuma. Zatim se bočica označi i stavlja u poseban bix za transport u laboratorij.

Ako pacijent ne proizvodi sluz, noć prije i ujutro na dan sakupljanja materijala potrebnog da mu ekspektorans :. ekstrakt korijena bijelog sljeza (mukaltin), bromheksin, ambroksol, itd - ili primijeniti iritirajuću udisanje korištenjem oprema ugrađena u sobi za prikupljanje ispljuvak. Tako prikupljeni materijal ne podliježe očuvanju i treba ga ispitati na dan sakupljanja. Kako bi izbjegao njegovo "uklanjanje" u laboratoriju u smjeru treba napraviti poseban znak.

Ako mikrobiološke studije nisu provedene u ovom postrojenju, prikupljeni dijagnostički materijal treba dostaviti u laboratorij, pod uvjetom da se materijal čuva u intervalima između isporuke u hladnjaku ili uporabom konzervansa. Dostaviti materijal u laboratorij u transportnim kutijama, koji se mogu lako dezinficirati. Svaki uzorak trebao bi biti priložen odgovarajućoj etiketi, a cjelokupna se cjelina popunjava priloženim obrascem.

Načini i učestalost ispitivanja bolesnika

U početnom, tzv. Dijagnostičkom pregledu pacijenta za tuberkulozu, potrebno je ispitati barem 3 sputum dijelova tijekom 2 ili 3 dana. prikupljene pod nadzorom medicinskog osoblja, što povećava učinkovitost mikroskopije.

Primarni screening za tuberkulozu treba provoditi sve medicinske dijagnostičke institucije zdravstvenog sustava. Nedavno su na osnovi kliničkih dijagnostičkih laboratorija organizirani takozvani centri mikroskopije, opremljeni modernim mikroskopima i opremom za sigurnost epidemije, kako bi se poboljšala učinkovitost početnog ispitivanja.

U anti-tuberkuloznim sredstvima koristi se probirni test koji uključuje trošenje sputuma ili drugi dijagnostički materijal najmanje 3 puta tijekom 3 dana. Tijekom liječenja, mikrobiološke studije redovito se provode barem jednom mjesečno tijekom intenzivne kemoterapijske faze. Pri prijelazu na fazu liječenja, studije se provode rjeđe - s intervalom od 2-3 mjeseca, dok se učestalost studije smanjuje na dva.

Značajke zbirke dijagnostičkih materijala za extrapulmonalnu tuberkulozu

U fokusu patološki materijal izvanplućni oblika TB - Mycobacterium tuberculosis niske koncentracije u njemu, što zahtijeva više osjetljive metode mikrobioloških studija, u prvom redu o rangiranju tehnike medija.

Uz tuberkulozu genitourinarnog sustava, urin je najdostupniji materijal za proučavanje. Zbirku urina treba obaviti posebno obučena medicinska sestra.

Vanjske genitalije se isperu vodom sapunom ili slabom otopinom kalijevog permanganata. Vanjsko otvaranje uretre pažljivo se obrađuje. U sterilnoj bočici se skuplja prosječni dio jutarnje urine: u muškaraca, naravno, kod žena, koristeći kateter. Urin iz bubrežnog zdjelice skuplja se u sterilnim epruvetama s kateterizacijom jednog ili dva bubrega, u potonjem slučaju - nužno odvojeno od svakog bubrega. Mala količina ovog urina se centrifugira, sediment se ispituje.

U muškaraca, spermija, punktati testisa, tajna prostate podvrgava se centrifugaciji da bi se dobio talog. S bilo kojom lokalizacijom određenog procesa u genitalnom području kod muškaraca, masaža prostate može potaknuti izlučivanje sekreta koje sadrže mycobacterium tuberculosis.

Menstrualna krv u žena prikuplja se sisanjem ili pomoću Kafka kape. Dobiveni materijal se oslobađa iz crvenih krvnih stanica, pranje je destiliranom vodom nakon čega slijedi centrifugiranje. Precipitat se ispituje.

Dijelovi cervikalnog kanala maternice sakupljaju se u nekom Kafka kapacitetu ili poklopcu, tj. Poželjno je akumulirati 1-2 ml patoloških materijala.

Materijal dobiven od operativnih intervencija na bubrege, genitalije. s biopsijama, strugotine iz endometrija, homogenizirati. Da bi to postigao, stavlja se u sterilni mort i temeljito zdrobi sterilnim škarama. U ovaj mulj doda se sterilne riječni pijesak u količini jednakoj svoje težine, a zatim prekrije sa 0,5-1.0 ml izotonične otopine natrijevog klorida, i sve se triturira sve dok masa u obliku paste sa dodatkom izotonične otopine natrijevog klorida (4-5 ml). Zatim se masi ostavlja da se otopi 1-1.5 minuta, pregledava se supernatant.

Tuberkuloza kostiju i zglobova. Pucnja (gnoj apscesa) dobivena sterilnom špricom stavlja se u sterilna posuđa i odmah se dostavlja u laboratorij. Sterilna pipeta, prethodno natopljena sterilnom izotoničnom otopinom natrijevog klorida, potrebno je 2-5 ml gnojida, prenijeti je u bocu kuglica i dodati još 2-3 ml izotonične otopine natrijevog klorida. Bočica je zatvorena plutom i potresana u aparat za jarbol 8-10 minuta. Ispitana je homogenizirana suspenzija.

U fistuliranim oblicima osteoartikularne tuberkuloze uzima se gnoj iz fistula. Veliko iscjedak skuplja izravno u ispitnu cijev. U slučaju naslanjanje pyorrhea fistula ispere sterilnom izotoničnom otopinom natrijevog klorida i isprani dijelovi su sakupljeni u epruvetu ili komad tampon impregniran gnoj poslan na analizu.

Kirurški materijal dobiven tijekom operacije na kostima i zglobovima mogu se sastojati od gnojne-nekrotično masa, granulacija, ožiljak, koštano tkivo sinovijalne membrane i druge podloge. Liječenje se provodi, kao u tuberkulozi bubrega.

Mikrobiološka studija sinovijalne tekućine u 3% -tnoj otopini natrijevog citrata (omjer 1: 1), kako bi se spriječila zgrušavanje, vrši se neposredno nakon probijanja.

Tuberkuloza limfnih čvorova. Također se ispituje gnoj, ekstrahiran tijekom probijanja limfnih čvorova. kao gnoj od apscesa. Tkiva limfnih čvorova dobiveni tijekom kirurških zahvata, biopsija, ispituju se, kao i kod drugih oblika tuberkuloze.

Istraživanje masnih stolica na mycobacterium tuberculosis je vrlo rijetko, zbog gotovo ukupnog nedostatka pozitivnih rezultata.

Mikroskopija mikobakterija

Sputum mikroskopija je relativno brz, jednostavan i jeftin način koji se treba koristiti u svim slučajevima sa sumnjom na tuberkulozu. Osim toga, ovo se istraživanje provodi radi procjene učinkovitosti kemoterapije i utvrđivanja oporavka ili neuspjeha liječenja ako ne postoji test kulture.

Koriste se dvije metode mikroskopskog pregleda:

  • metoda izravne mikroskopije, kada se umetak izrađuje izravno iz dijagnostičkog materijala;
  • metoda mikroskopije sedimenta pripremljenog iz materijala tretiranog dekontaminantom za kulturu.

Prva metoda se koristi u onim laboratorijima gdje se provode samo mikroskopske studije (klinički i dijagnostički laboratoriji opće medicinske mreže).

Najbolji rezultati mikroskopskog pregleda dobiveni su koncentracijom dijagnostičkog materijala (na primjer centrifugiranjem).

Za otkrivanje mikobakterijskih tuberkuloza s vjerojatnošću od 50% za vrijeme mikroskopije, 1 ml ispljuvka trebalo bi sadržavati više od 5000 mikrobnih stanica. Ispljuvak bolesnika s plućnim oblicima tuberkuloze obično sadrži značajnu količinu kiselih bakterija, što im omogućuje pouzdano otkrivanje bakterioskopijom. Dijagnostička osjetljivost ove metode može se poboljšati ispitivanjem nekoliko uzoraka sputuma jednog pacijenta. Negativan rezultat bakteriskopskog pregleda ne isključuje dijagnozu tuberkuloze, jer ispljuvak nekih bolesnika sadrži manje mikobakterija nego što se može detektirati mikroskopom. Loša priprema nogu ista može također uzrokovati negativni rezultat bakteriskopskog pregleda.

Najčešća metoda detekcije kiselih mikobakterija u testu je boja prema Tsiol-Nelsenu. Metoda se temelji na penetraciji karbolnog fuchsina u mikrobnu stanicu kroz membranu koja uključuje vosak-lipidni sloj, istodobno zagrijavajući i snažno jetkanje djelovanjem fenola. Naknadna obezbojenost premaza s 25% otopinom sumporne kiseline ili 3% klorovodične kiseline dovodi do obezbojenja svih ne-kiselih brzih struktura. Odbojeni elementi premaza se oboje s 0,3% -tnom otopinom metilenskog plavog. Mikobakterija ne percipira uobičajene boje anilina, zbog čega su kiselinski brzi mikobakteri obojeni grimizno-crvenim i drugi mikrobovi i stanični elementi - u plavom.

Za mrlja obojene Ziehl-Nelsenu korištenje binokularnog svjetlosni mikroskop s objektivom za uljnu imerziju (90- ili 100-struko povećanje) i okulara u 7- do 10-struko povećanje. Istražite 100 vidnih polja, što je dovoljno za identificiranje pojedinačnih mikobakterija u smearu. U tom slučaju, ako je rezultat ovog istraživanja je negativan, potvrditi preporučenim Pogledaj još 200 polja pogledom. Zabilježite rezultate, ukazujući na broj otkrivenih kiselih bacila (KUM).

Osim ove tehnike, fluorochroms boja se koriste za luminescentnu mikroskopiju, što omogućuje postizanje najboljih rezultata. Upotreba ove metode povećava učinkovitost mikroskopije za 10-15%. Kod liječenja mikobakterija s luminiscentnim bojama (auramin, rodamin, itd.), Te se tvari također vežu na strukture voska mikrobne stanice. Kada zrači obojene stanice uz uzbudljiv izvor svjetlosti (određeni spektar ultraljubičastog zračenja), počinju sjajiti s narančastim ili svijetlo crvenim svjetlom na crnoj ili tamnozelenkastoj pozadini. U vezi s visoke svjetline i kontrasta vidljive slike može se smanjiti ukupna povećanja mikroskopa 4-10 puta, nego proširena vidno polje i smanjuje vrijeme pripreme gledanje. Uz to, zbog mnogo veće dubine polja, možete povećati udobnost studije.

Kada se fluorescentna mikroskopija koristi za skeniranje istog područja, razmaz se značajno manje vremena od svjetlosnog mikroskopa Tsiol-Nelsen bojenja. Ako za radni dan mikroskop ispituje oko 20-25 takvih razmaza, tada uz pomoć fluorescentne mikroskopije istodobno može ispitivati ​​više od 60 do 80 uzoraka. Iskusni mikroskopi znaju da je obojenost stanica s mješavinom auramina i rodamina na neki način specifična za kiselinski brzi bacili, koji u ovom slučaju izgledaju kao zlatni štapići. Saprofiti su oslikani u zelenkastoj boji.

Još jedna važna prednost metode fluorescentne mikroskopije - sposobnost detekcije promijenjen Mycobacterium, izgubio pod utjecajem nepovoljnih čimbenika, uključujući intenzivne kemoterapije, kislotousotoychivosti imovine i ne prepoznaje se u vezi s ovim bojenja Ziehl-Nelsenu.

Nedostaci metode fluorescentne mikroskopije uključuju relativno visoke troškove mikroskopa i njegovo djelovanje. Međutim, u centraliziranim ili drugim velikim laboratorijima, gdje opterećenje premašuje normu od 3 laboratorija koji rade s tri konvencionalna mikroskopa, jeftinije koristiti jedan fluorescentni mikroskop.

Bakterijske metode imaju visoku specifičnost (89-100%). Oko 97% pozitivnih rezultata dobivenih bilo kojom metodom mikroskopije nedvosmisleno je potvrđeno rezultatima sjetve.

Treba napomenuti da je u mikroskopskim pregledom razmaza od patološkog materijala ne može utvrditi vrsta kiseline brze bacila otkriven. metoda mikroskopija omogućava dati mišljenje samo o prisutnosti ili odsutnosti kiseline u pripremi mikroorganizama, koji se može objasniti postojanjem u prirodi velikog broja morfološki sličan tuberkulozan mikobakterija složenih rezistentnih mikroorganizama nontubercular kiseline.

Rezultati mikroskopije procjenjuju se u polukvantitativnim jedinicama.

Da bismo mogli usporediti rezultate različitih metoda mikroskopije, uvedeni su empirijski koeficijenti. Na primjer, za usporedbu rezultata razmaza obojenih fluorescentne boje, istraživanje podataka svjetlosni mikroskop (1.000 puta povećanje), potrebno je podijeliti broj kiseline brzo bacila detektiran pomoću fluorescentnog mikroskopa, odgovarajući koeficijent na 250-puta povećanje - do 10, 450 puta - do 4, sa 630 puta - do 2.

Značajke mikroskopije za extrapulmonalnu tuberkulozu

Izvršena je izravna mikroskopija, kao i mikroskopija razmaza pripremljenih nakon obogaćivanja, praćena Tsiol-Nelsen bojanjem ili luminescentnim bojama. Izravna mikroskopija maziva je neučinkovita zbog niske koncentracije mikobakterija u materijalu, pa je stoga racionalnije koristiti metode obogaćivanja. Najučinkovitiji je centrifugiranje. Ako je biološki materijal viskozan, centrifugiranje se koristi uz istodobnu homogenizaciju i ukapljivanje materijala, koji se provodi pomoću centrifuga velikih brzina sa snagom centrifugiranja od 3000 g i otopinama hipoklorita. Druge metode obogaćivanja, poput mikro flotacije, trenutno se ne koriste zbog stvaranja biološki opasnih aerosola.

Kulturna metoda dijagnoze tuberkuloze

Metoda sjetve, ili metoda kulture, osjetljivija je od testne mikroskopije i ima niz prednosti nad tim potonjem. Omogućuje otkrivanje nekoliko desetaka životnih mikobakterija u ispitnom materijalu i ima veliku dijagnostičku vrijednost. To je osobito važno pri ispitivanju materijala novodijagnosticiranih ili liječenih bolesnika koji oslobađaju malu količinu mikobakterija.

U usporedbi s mikroskopijom, istraživanje kulture omogućuje povećanje broja pacijenata s TB-om dijagnosticiranim za više od 15-25%, kao i potvrđivanje tuberkuloze u ranijim fazama, kada je bolest još uvijek podložna liječenju. Vrlo važna prednost ispitivanja kulture je mogućnost dobivanja uzbudljive kulture koja se može identificirati i proučavati s obzirom na osjetljivost na lijek, virulenciju i druga biološka svojstva.

Nedostaci metoda uzgoja uključuju njihovo trajanje (vrijeme čekanja materijala doseže 10 tjedana). veći trošak, složenost obrade dijagnostičkog materijala.

Načela predviđanja liječenja dijagnostičkog materijala

Konvencionalne mikrobiološke metode ne mogu se koristiti u provođenju istraživanja tuberkuloze. To je zbog činjenice. da mycobacterium tuberculosis raste vrlo sporo, a većina kliničkih uzoraka sadrži brzo rastuće piogene i raspadljive mikroorganizme, gljive. Njihov brzi rast u bogatim hranjivim medijima ometa razvoj mikobakterija i ne dopušta da se dodijeli uzročnika tuberkuloze, tako da prije sadnje nužno dijagnostički materijal prethodno obrađen. Osim toga, mikobakterije oslobođene od dišnih putova pacijenta obično su okružene velikom količinom sluzi, što je otežano koncentriranje. U tom smislu, prije sadnje sputuma i drugih sličnih materijala, njihovo ukapljivanje, dekontaminacija je neophodna.

Svi detergenti i dekontamini imaju više ili manje izražen toksični učinak na mikobakterije. Kao rezultat obrade, do 90% mikobakterija može umrijeti. Kako bi dovoljno za mikobakterije stanovništva, štede potrebu za korištenjem tehnike obrade koje omogućuju, s jedne strane, za suzbijanje brzo rastuće piogeni bakterije i truo, as druge - za očuvanje vitalnosti mikobakterija prisutnih u materijalu.

Ovisno o materijalu, sa stupnjem homogenosti i onečišćenja za pre-obradu pomoću različitih decontaminant: sputum - 4% otopina natrij hidroksida, otopine trohzameschonnogo natrijev fosfat 10%, benzalkonijev klorid, trinatrij fosfat, NALC-NaOH (N-acetil-L-cistein natrijev hidroksid) u konačnoj koncentraciji od 1% NaOH, u urinu i drugih tekućih materijala - otopinom sumporne kiseline 3%, za onečišćenih uzorke materijala koji sadrže u masti - otopina oksalne kiseline do 5%. Osim toga, u nekim slučajevima koriste se enzimi, surfaktanti (deterdženti). Primjena Tween deterdženti i neki drugi mikobakterijsku smrt popraćena manje stanica (40-50% preživi). Međutim, mogu se koristiti samo za tekuće materijale. Najveća distribucija na svijetu bila je NALC-NaOH. proizvedena u setovima. Ova metoda omogućuje dodjeljivanje više od 85% populacije mikobakterijskih stanica. Dekontaminacija tkanesoderzhaschih tvari teže pogoditi, jer je stupanj disperzije materijala tijekom homogenizacije teško. Na primjer, za obradu biopsije limfnih čvorova često popraćena povećanom učestalosti kontaminacije s tuđ flore. U ovom slučaju se može koristiti 1% etonija.

Nepomoćan materijal homogenizira se sa staklenim zrncima u prisustvu dekontaminanta. Tekući materijali se pre-centrifugiraju i obrađuje se samo precipitat.

Tehnike sjetve i inkubacije

Nakon predobrade, materijal se centrifugira, čime se precipitiraju mikobakterije i povećavaju njihov sadržaj u sedimentu ("obogaćivanje mulja"). Rezultirajući talog se neutralizira i inokulira (inokulira) s gustom medijem hranjivih tvari ili cijevi s tekućim (polutvrlim) medijem. Iz ostatka sedimenta pripremaju se pokusi za mikroskopski pregled. Tehnika sjetve treba spriječiti unakrsnu kontaminaciju dijagnostičkog materijala.

Za pouzdano kliničko tumačenje rezultata mikrobiološke studije treba slijediti sljedeće pravilo: mikroskopske i studije kulture moraju se provesti paralelno iz istog uzorka dijagnostičkog materijala.

Cijepljene cijevi se stave u termostat na 37 ° C 2 dana u vodoravnom položaju. To osigurava ravnomjernu apsorpciju materijala u medij kulture. Nakon 2 dana, epruvete se prenesu u vertikalni položaj i hermetički brtve gumenim ili silikonskim čepovima kako bi se spriječilo sušenje usitnjenog medija.

Žitarice se čuvaju u termostatu na 37 ° C u trajanju od 10-12 tjedana uz redovno tjedno gledanje. Za svaki pregled bilježe se sljedeći parametri:

  • razdoblje vizualno promatranog od dana sjetve rasta;
  • stopa rasta (broj CFU);
  • kontaminacija usjeva stranom mikrobnom florom ili gljivicama (takve cijevi se uklanjaju);
  • nedostatak vidljivog rasta. Cijevi ostaju u termostatu do sljedećeg pregledavanja.

Hranjivi mediji

Za uzgoj mikobakterija koriste se razni mediji hranjivih tvari; gusta, polutekuća tekućina. Međutim, nijedan od poznatih nutrientnih medija nema svojstva koja osiguravaju rast svih mikobakterijskih stanica. U svezi s tim, preporuča se da se 2-3 hranjivog medija različitog sastava istodobno koriste kako bi se povećala učinkovitost.

WHO preporučuje Levenstein-Jensen okoliš kao standardni medij za primarnu izolaciju uzročnika tuberkuloze i za određivanje njegove osjetljivosti na lijekove. Ovo je gusto jaje okoliša na kojem se dobiva mikobakterija 20.-25. Dana nakon što je posijala bakterioskopski pozitivan materijal. Uzgoj bakterioskopski negativnog materijala zahtijeva dulje razdoblje inkubacije (do 10-12 tjedana).

U našoj zemlji, predloženi E.R. Finnovo jaje okoliš Finn-II. Razlikuje se time, umjesto L-asparagina, koristi natrijev glutamat, koji aktivira druge načine sintetiziranja aminokiselina mikobakterija. Rast se pojavljuje na ovom mediju nešto ranije, a učestalost dodjele mikobakterija je 6-8% viša nego u Lowenstein-Jensen mediju.

Kako bi se poboljšala učinkovitost bakteriološku dijagnostiku tuberkuloze izvanplućni je prikladno uključiti u složenim hranilistima modificiranih srednje Finn-II. Da bi se ubrzao rast, 0,05% natrijevog tioglikolata koji smanjuje koncentraciju kisika dodaje se dodatno u Finn-II hranjivi medij. Za zaštitu od enzima Mycobacterium sustava toksičnih produkata peroksidacije lipida u hranjivom mediju Finn-II daje antioksidans α-tokoferol acetat u koncentraciji od 0,001 mikrograma / ml. Sjeme dijagnostičkog materijala provodi se prema standardnom postupku.

U laboratorijima za borbu protiv tuberkuloze u Rusiji koriste se druge izmjene gustih nutrijenata; predložio G.G. Mordovska hranjiva tvar "New", koju je razvio V.A. Anični hranjivi mediji A-6 i A-9 itd.

S obzirom na činjenicu da je u procesu kemoterapije do oštećenja različitih metaboličkih sustava mikrobnih stanica, neki mikobakterijski stanovništvo gubi sposobnost da se razvije obično u uobičajenim hranjivim medijima i zahtijeva osmotski uravnotežen (ili polu-tekuće) za kulturu.

Procjena i bilježenje rezultata sijanja dijagnostičkog materijala

Neki sojevi i vrste mikobakterija rastu polako, rast se može pojaviti čak i do 90. dana. Broj takvih usjeva je mali, ali to omogućava izdržavanje usjeva u termostatu 2.5-3 mjeseca.

Virulentne kulture mycobacterium tuberculosis obično rastu na gustim uvjetima jaja u obliku R-oblika kolonija različitih veličina i vrsta. Kolonije su suhe, naborane, slonovače, blago pigmentirane. U drugim medijima, kolonija mycobacterium tuberculosis svibanj biti vlažniji. Nakon kemoterapije ili tijekom liječenja mogu se dodijeliti glatke kolonije s vlažnim rastom (S-oblike).

Prilikom izolacije usjeva, niz specijalnih studija koristi se za razlikovanje mycobacterium tuberculosis od ne-tuberkuloznih mikobakterija i saprofitnih otpornih na kiseline.

Pozitivan odgovor je dao nakon obaveznog mikroskopskog pregleda od obojeni Ziehl-Nelsenu PAPA kolonija. U slučaju rasta mikobakterija u testu otkriti svijetlo crvene štapići leži pojedinačno ili u skupinama, tvore nakupine u obliku pusta ili pletenica. U mladih kulturama, posebno izoliran dugotrajnog liječenje bolesnika s kemoterapijom, mikobakterije razlikuju eksprimirani polimorfizam, dok prisutnost šipke obliku, zajedno s kratkim, gotovo prekomjernog rasta kokoidnih ili izduženih inačice koje nalikuju micelija.

Stopa rasta mikobakterija je naznačena sljedećom shemom: (+) - 1-20 cfu in vitro (slabo izlučivanje bakterija); (++) - 20-100 CFU in vitro (umjereno bakterijsko izlučivanje); (+++) -> 100 CFU in vitro (obilni bakterijski izlučivanje). U laboratorijskoj dijagnozi tuberkuloze, nije dovoljno odgovoriti je li mikobakterija detektirana jednim ili drugim metodom. imaju detaljno razumijevanje opsega i prirode mikobakterijskog populacije, njegovog sastava i svojstava. To su ti podaci koji nam omogućuju ispravno tumačenje stanja procesa, planiranje taktike i pravodobno ispravljanje liječenja.

Posljednjih godina, kako bi se ubrzao rast mikobakterija, hranjivi mediji na agarnoj osnovi s različitim aditivima rasta i uporabom posebne mješavine plinova su predloženi. Za dobivanje rasta mikobakterija na tim medijima, tijekom uzgoja nastaje atmosfera s visokim sadržajem ugljičnog dioksida (4-7%). U tu svrhu posebna CO2-inkubatori. Međutim, najrazvijeniji automatizirani sustavi za uzgoj mikobakterija: MGIT-BACTEC-960 i MB / Bact.

Jedan od takvih sustava - MGIT sustav (rasta mikobakterija pokazuje cijevi), koji se odnosi na razvoj visoke tehnologije i namijenjena je za brzu bakteriološke dijagnostici tuberculosis i Mycobacterium podložnost prva linija lijekovima i neke druge linije lijekova. MGIT je usredotočen na korištenje kao dio VASTES-960 uređaja. Mikroorganizmi se uzgajaju u posebnim cijevima s tekućim nutrientnim medijem na temelju modificiranog Middlebrook-7H9 medija. Za poticanje rasta mikobakterija i suzbijanju tuđ mikroflore dodataka za rast koji se koristi rast MGIT dodatak za rast, a smjesa antimikrobnih sredstava Panta.

Rast mikroorganizama bilježi se optički. Temelji se na fluorescenciji, što se događa kada kisik konzumira mikobakterije tijekom rasta. Fluorkromna boja ovisna o kisiku nalazi se na dnu posebne epruvete i prekrivena slojem silikona. Umnožavanje mikobakterije dovodi do smanjenja količine kisika u cijevi i smanjivanje koncentracije koja uzrokuje porast fluorescencije koja postaje vidljiva pod zračenjem sa ultraljubičastim svjetlom cijevi i automatski zabilježen fotosenzorom ugrađen aparat VASTES-960. Intenzitet luminescencije zabilježen je u jedinicama rasta (GU-jedinice rasta). Podaci o rastu zabilježeni su u računalu, gdje se mogu spremiti automatski. Računalna analiza krivulja rasta može pružiti informacije o prisutnosti raznih Mycobacterium bazena, uključujući nontubercular, a također pomaže za procjenu svojstava rasta mikobakterija.

Kao rezultat uvođenja takvih sustava, vrijeme za rast mikobakterija značajno je smanjeno, prosječno 11 dana na VASTES-960 i 19 dana na MB / Bact u odnosu na 33 dana na standardnom gustu hranjivu podlogu. Treba napomenuti da ti sustavi zahtijevaju visoko kvalificirano osoblje. Sjetva materijala na tekućim medijima nužno prati sjetva na mediju Levenstein-Jensen, koji igra ulogu kopirača u slučajevima kada mikobakterijska tuberkuloza ne uzrokuje rast u drugim medijima.

Određivanje osjetljivosti lijekova mikobakterija

Određivanje spektra i stupnja osjetljivosti mikobakterija na lijekove protiv tuberkuloze ima veliku kliničku važnost, kao i za epidemiološku procjenu širenja tuberkuloze kod otpornosti na lijekove. Nadalje, praćenje otpornosti na lijekove omogućuje procjenu učinkovitosti tuberkuloznog programa u cjelini, što je integralni pokazatelj učinka svih komponenti antitoaktivnih tuberkuloza.

Mnogostrukost i vrijeme osjetljivosti na lijek:

  • prije početka liječenja jednom za utvrđivanje strategije i taktike liječenja:
  • kada se izoliraju iz bolesnih kultura različitih materijala (sputuma, BAL tekućine, urina, eksudati, liker, itd.), svi izolirani sojevi se ispituju:
  • na kraju intenzivne faze liječenja u odsustvu kliničke i radiološke dinamike:
  • ako je potrebno promijeniti režim liječenja u sljedećim slučajevima:
    • odsutnost pljuskanja;
    • ponovna izolacija kulture nakon što je naglo negativan;
    • drastično povećanje broja CMU-a u obrvu nakon početnog pada. Dobro je poznato da su sojevi mycobacterium tuberculosis, koji su heterogeni u smislu osjetljivosti na lijekove, izolirani iz materijala od pacijenta s tuberkulozom. Osjetljivost sojeva na lijekove protiv tuberkuloze može se razlikovati u rasponu lijekova, stupnja, učestalosti i učestalosti pojavljivanja otpora.

Stupanj rezistencije na lijek Mycobacterium tuberculosis je određena u skladu s utvrđenim kriterijima, koji su usmjereni na kliničkom značenju i stabilnost ovisi o aktivnosti protiv tuberkuloze droge, farmakokinetiku, koncentracije lezije. maksimalnu terapijsku dozu i tako dalje.

Određivanje osjetljivosti lijekova mikobakterija se provodi mikrobiološkim metodama:

  • Apsolutne koncentracije (postupak razrjeđivanja na gustim ili tekućim medijima hranjivih tvari),
  • proporcije,
  • koeficijent otpora.

Obično stabilnost očituje kao vizualno primjetan rast kolonija Mycobacterium tuberculosis, ali postoje tehnike koje izazivaju rane faze rasta u diobu stanica Mycobacterium u obliku reakcije u boji. Ove metode skratiti vrijeme testiranja od 3-4 do 2 tjedna.

Kao ujedinjeni u Rusiji je proširena, preporučio kemoterapije metodom KOJI odbora apsolutnih koncentracija, koja je s metodološkog gledišta, je najjednostavniji, ali to zahtijeva visoku preciznost i standardizaciju laboratorijskih postupaka. Ispitivanje osjetljivosti na lijek sastoji se od seta epruvete s hranjivim medijem modificiranim anti-TB lijekovima. Set sastoji od 2-3 cijevi s različitim koncentracijama od lijekova se koristi, jedan kontrolne cijevi bez lijeka za okoliš i jedna cijev, koja sadrži 1.000 mcg / ml natrij Sali tsilovokislogo ili 500 ug / ml paranitrobenzoynoy kiselina nontubercular otkrivanja rasta mikobakterija.

Za pripremu seta medija s pripravcima koristi se modificirani medij Levenstein-Jensen (bez škroba) koji se ulijeva u posude. U svakoj od bočica dodana je specifična količina prikladnog razrjeđenja antituberkuloznog pripravka. Sadržaji tikvica temeljito se izmiješaju, sipaju se u cijevi i presavijeni u nagnutom položaju 40 minuta pri temperaturi od 85 ° C. Preporuča se cirkuliranje medija u električnom rewinderu s automatskom regulacijom temperature. Srijeda s anti-TB lijekovima

Serija 1 može se čuvati u hladnjaku na 2-4 ° C tijekom 1 mjeseca, pripreme drugog reda - najviše 2 tjedna. Prihvaćanje medija s pripravcima na sobnoj temperaturi neprihvatljivo je. Prilikom pripreme otopina anti-tuberkuloznih lijekova uzima se u obzir njihova aktivnost, računajući koncentraciju prilagođenu molekulskoj masi nespecifičnog dijela pripravka, čistoći itd. Da bi se odredila osjetljivost na lijek, koriste se samo kemijski čiste tvari.

Princip metode je odrediti koncentraciju antituberkuloznog lijeka koji inhibira rast značajnog dijela mikobakterijske populacije. Ako je to ispravno, ova metoda ima dobru pouzdanost.

Prije testiranja, potrebno je osigurati da izolirana kultura mikobakterije tuberkuloze ne posjeduje nepoznatu mikroflora. Iz kulture mikobakterija u 0,9% otopini natrij klorida, priprema se homogena suspenzija koja sadrži 500 milijuna mikrobnih tijela po ml (standard optičke zamućenosti od 5 jedinica). Dobivena suspenzija se razrijedi s 0,9% otopinom natrijevog klorida (1:10) i doda se 0,2 ml suspenzije u svaku epruvetu kulture medija kulture. Nasadne cijevi se stave u termostat na 37 ° C i drže vodoravnom pozicijom 2-3 dana, tako da nagnuta površina medija kulture bude ujednačeno inokulirana sa suspenzijom mycobacterium tuberculosis. Cijevi se zatim prenesu u vertikalni položaj i inkubiraju 3-4 tjedna. Rezultati se bilježe nakon 3-4 tjedna.

Budući da je vrijeme izlučivanja ekskrecije iz kliničkog materijala na hranjivom mediju barem 1-1,5 mjeseci, rezultati određivanja osjetljivosti lijeka ovom metodom mogu se dobiti ne prije 2-2,5 mjeseci nakon sjetve materijala. Ovo je jedan od glavnih nedostataka metode.

Tumačiti rezultate određivanja osjetljivosti lijekova mikobakterija na temelju određenih kriterija. Na čvrstom mediju za kulturu, smatra osjetljivi na koncentraciju lijeka koji je sadržan u mediju, ako je broj kolonija mikobakterija uzgaja in vitro s ove droge je ne više od 20 s obilnom rasta u kontrolnoj epruveti bez lijekova. Samo u prisutnosti više od 20 kolonija smatra se kultura koja je otporna na ovu koncentraciju. U praksi, pri dobivanju rasta dobivaju se ispitne cijevi blizu 20 cfu. potrebno je obavijestiti kliničku jedinicu da je osjetljivost ili otpor u ovom slučaju granična, jer ponekad može objasniti nejasnu dinamiku kliničkih pokazatelja.

Za različite lijekove uspostavljena je određena koncentracija, pri čemu se opaža reprodukcija kritičnog dijela mikobakterijske populacije. Te koncentracije nazivaju se "kritičnim". Kao kriterij stabilnosti, koristi se rast populacije mikobakterija na hranjivom mediju s pripravkom pri kritičnoj koncentraciji.

U domaćoj TB praksi, pri određivanju otpornosti na lijekove, one nisu ograničene samo na određivanje kritičnih koncentracija. To je zbog činjenice. da je razina proširena definicija otpornost na lijek omogućuje medicinarima da preciznije pozicioniranje taktika kemoterapiju koristeći znanje potenciranje djelovanja kombinacije lijekova, križaju se očekuje otpor ili primijeniti učinkovitiji lijekovi skupina koristi protiv tuberkuloze droge.

Apsolutna metoda koncentracije je najjednostavnija, ali je također najosjetljivija na pogreške koje se vrše prilikom izvođenja. Pouzdaniji, pogotovo u određivanju osjetljivosti na lijekove druge linije, i zajednički izvan Rusije, je metoda proporcija. Uzima u obzir nedostatke metode apsolutnih koncentracija, ali u izvršenju je naporno.

Metoda je vrlo slična metodi apsolutne koncentracije. Priprema ispitnih epruveta s lijekovima provodi se na isti način. kao u apsolutnoj metodi koncentracije. Međutim, sjemenska doza suspenzije mycobacterium tuberculosis je smanjena za faktor 10. što eliminira učestalost spontane rezistencije nekih sojeva mycobacterium tuberculosis na takve lijekove kao što su Etambutol, protionamid, capreomycin. Kao kontrola, koriste se 2 ili 3 epruvete s dozom sjemena jednake u epruvetama, sukcesivno razrijeđene 10 i 100 puta. Kriterij stabilnosti je udio vizualno promatranog rasta mikobakterijum tuberkuloze. Za lijekove iz serije 1, kriterij stabilnosti je višak rasta od 1% početne populacije, za lijekove drugog reda - povećanje od 1 ili više od 10% početnog, ovisno o odabranoj kritičnoj koncentraciji.

Godine 1997. radna skupina WHO i Međunarodne unije za identifikaciju dobro tuberkuloze otpora TB droga je napravio prilagodbe tim kriterijima, nudeći smatra otporan na mikobakterije, koja raste na čvrste jaje medija Lowenstein-Jensen u sljedećim koncentracijama:

  • dihidrostreptomicin - 4 ug / ml;
  • izoniazid 0,2 ug / ml:
  • rifampicin 40 ug / ml:
  • Etambutol je 2 ug / ml.

U 2001. godini predložene su kritične koncentracije za sljedeće lijekove drugog reda (za kritični udio od 1%):

  • kapreomicin - 40 mcg / ml;
  • protionamid - 40 mcg / ml;
  • kanamicin - 30 ug / ml;
  • viomicin - 30 mcg / ml;
  • cikloserin 40 ug / ml;
  • aminosalicilna kiselina - 0,5 ug / ml;
  • ofloxacin - 2 ug / ml.

Rezultati rasta procjenjuju se nakon 4 tjedna kao preliminarni i nakon 6 tjedana uzgoja - kao konačni.

Da bi se odredila osjetljivost lijeka na pirazinamid, koja se široko koristi u suvremenoj kemoterapiji za tuberkulozu, preporučena kritična koncentracija je 200 ug / ml. Međutim, još uvijek nema opće prihvaćene metode za određivanje otpornosti na lijek na kruti medij za hranjive tvari, budući da se njegova antibakterijska aktivnost očituje samo u kiselom mediju (pH o C;

  • odsutnost pigmentacije (bjelokost);
  • označena kiselom-brzo bojom;
  • pozitivan niacin test;
  • pozitivno testiranje nitratne reduktaze;
  • odsutnost termostabilne katalaze (68 ° C).
  • Odsutnost rasta na Levenstein-Jensen mediju koji sadrži:
    • 1000 ug / ml natrij salicilata,
    • 500 ug / ml paranitrobenzojeve kiseline,
    • 5% natrij klorid:
  • rast u prisutnosti 1-5 μg / ml tiofen-2-karboksilne kiseline.
  • Važnost diferencijacije izoliranih mikobakterija značajno će se povećati s povećanjem učestalosti snimanja slučajeva HIV / AIDS povezanih s tuberkulozom ili mikobakterijem. Trenutno ne postoji apsolutna sigurnost spremnosti praktičnih regionalnih laboratorija da pravilno izvode ovaj volumen rada.

    Imunološka dijagnoza tuberkuloze

    Postoji niz univerzalnih pojava, lijekova i imunoloških testova koji su izvorno pronađeni upravo tuberkulozom ili na modelu imunološkog odgovora na mikobakterije. To uključuje BCG tuberkulina, takvu pojavu kao kožni DTH (tuberkulina - Pirquet i Mantoux reakcija), reakcija na potkožne tuberkulinske senzibilizirane životinje (Koch fenomen). Jedno od prvih antitijela u zaraznoj bolesti također je otkriveno u tuberkulozi. Naravno, dublje razumijevanje dobrih mehanizama tuberkuloze imunitet i njihova genetska kontrola, veća može biti korištenje imunoloških metoda i lijekova koji utječu na imunološki sustav, za rješavanje praktičnih problema TB.

    Najvažniji i najteži praktični problem trenutno se smatra prepoznavanjem tuberkuloze u procesu masovnog probira populacije. Međutim, unatoč brojnim izvješćima o "uspjehu" (na ograničenom materijalu), ne postoji prikladna imunološka metoda (reproducibilna u "bilo kojem ruku") i droga prikladna za tu svrhu.

    Imunološke metode, osobito serološke studije (određivanje antigena, protutijela) i tuberkulin izazvane testove vrlo su široko korištene u kliničkoj praksi.

    U prvom redu među imunološkim istraživanjima koja se koriste u diferencijalnoj dijagnostici, postoje serološke metode - određivanje antigena i protutijela u različitim okruženjima tijela.

    Specifičnost protutijela na mikobakterije tuberkuloze ovisi o antigenom korištenim u imunotestu. Predložena je značajna količina antigena, od kojih je prva tuberkulin PPD:

    • PAP i druge složene pripravke iz tekućine za kulturu;
    • ultrazvučna raspad;
    • Ekstrakt Tritona i ostali kompleksni pripravci staničnih stijenki;
    • 5-antigen (Daniel);
    • 60-antigen (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • žičani faktor (trehaloza-6,6-di-mikollat);
    • fenolnih i drugih glikolipida;
    • lipopolisaharid;
    • fibronektin-vezujući antigen;
    • proteini (najčešće rekombinantni); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 CDA itd.

    Kao rezultat godina istraživanja od strane ruskih i stranih znanstvenika otkrila temeljne zakone i učinkovitost antitijela serološko dijagnosticiranje tuberkuloze: složenije antigen, veća osjetljivost i nižu specifičnost testa. Specifičnost u različitim zemljama varira ovisno o broju stanovnika infekcije M. tuberculosis i nontubercular mikobakterija iz noseći BCG cijepljenje i drugih. Kod djece, sadržaj informacije o serodiagnosis je niža nego u odraslih. U primarnoj tuberkulozi (češće djeci), definicija IgM je više informativna. s sekundarnim IgG. Kod bolesnika zaraženih HIV-om smanjena je informativna vrijednost serodiagnoze u određivanju protutijela. Određivanje učinkovitosti antitijela ovisi o broju „klinički aspekti”: postupak aktivnost (prisutnost ili odsutnost za „izoliranje”, mikobakterija prisutnost raspadanja šupljina, stupnja infiltracije), učestalost postupka, trajanje toka.

    Osjetljivost metode enzimskog imunološkog testa (ELISA) je oko 70%. Nedovoljna učinkovitost studije je zbog svoje niske specifičnosti. Razmotreno je mogućnost korištenja seroloških pregleda u skupinama s visokim rizikom, osobito među osobama s promjenama nakon tuberkuloze u plućima.

    Za poboljšanje specifičnosti ELISA nastaviti potragu za više specifičnih antigena, uključujući i one proizvedene genetskim inženjeringom: (. Vidi gore) ESAT-6, i drugi.. Upotreba strogo specifičnih antigena (38 kDa, ESAT) povećava specifičnost. ali značajno smanjuje osjetljivost analize. Uz IFA (eksperimentalno laboratorijskih pretraga sustava. Npr Pathozyme ELISA kit) također osigurava komplete s bočnom imunokromatografskc filtracijom (Mycodot), kao i drugih sličnih testova (dot-analiza na membranu) s vizualnom procjenom rezultata ispitivanja. Tijekom ovih testova, analiza se provodi 10-30 minuta; oni ne zahtijevaju posebnu opremu, zahtijevaju vizualnu procjenu rezultata, koja je povezana s određenom subjektivnošću. Ove metode su otprilike iste karakteristike osjetljivosti i specifičnosti (70% i 90-93%, odnosno) kao tradicionalne ELISA.

    Korištenje metoda imunološke analize ima određenu vrijednost kao dodatni, uzeti u obzir u kompleksu korištenih metoda, u diferencijalnoj dijagnostici tuberkuloze, posebno u dijagnostici njezinih extrapulmonarnih oblika. Najučinkovitija ELISA metoda je u dijagnostici tuberkuloznog meningitisa u proučavanju cerebrospinalne tekućine. U ovom slučaju, osjetljivost analize je 80-85%, a specifičnost je 97-98%. Postoje podaci o učinkovitosti otkrivanja antitijela na mikobakterije tuberkuloze u tekućini za suzenje u dijagnostici tuberkuloznog uveitisa.

    Indukcija sinteze gama interferona in vitro

    Gamma interferon (IFN-γ) je specifični faktor imunološkog obrane ostvaren aktiviranjem enzima enzima makrofaga. Indukcija sinteze IFN-γ senzibiliziranim T-limfocitima uzrokuje njihovu interakciju s antigenom mikobakterija.

    Kao antigeni koji se koriste kao tuberkulinski PPD. i specifične antigene, dobivene genetskim inženjeringom, posebno antigena ESAT-6 (ranije izlučuje antigen koja ima molekularnu masu 6 kDa) i HFP-10 (filtrat kulture protein 10 kDa). Genetski inženjering ili rekombinantni antigeni nisu prisutni u stanicama BCG cjepiva i drugim mikobakterijama. Kada se koristi tuberkulin, rezultati indukcijskog testa IFN-γ su usporedivi s rezultatima tuberkulinskog testiranja kože (izravna korelacija). Kada koristite genetski inženjerske antigene, rezultati testa su specifičniji i ne ovise o prethodnom BCG cijepljenju. Kod ispitivanja cijepljenih osoba koje nisu imale kontakt s tuberkuloznom infekcijom, specifičnost testa je 99%. Osjetljivost testa kod pacijenata s tuberkulozom varira od 81 do 89%.

    Testovi i dijagnostički alati su razvijeni na temelju kratkoročni uzgoj stanica ili cijeli krvnih mononuklearnih stanica izoliranih iz krvi s antigenima Mycobacterium tuberculosis in vitro s naknadnim određivanje koncentracije IFN-y ili prebrojavanjem broja T limfocita koje sintetiziraju IFN-y u. Koncentracija interferona sintetizirana je in vitro je određena s ELISA korištenjem monoklonskih protutijela vezne IFN-y. Zatim, kalibracijom standardnog IFN-y, njegova koncentracija se određuje u epruveti ili epruveti ploče.

    Prilikom provođenja Elispot testa, broj T-limocita koji sintetiziraju IFN-γ. se broje na površini ploče obložene protutijelima na IFN-y.

    programeri Diagnosticum na IFN-γ in vitro putem indukcije, koji je odobren od strane Agencije za lijekove i američke proizvode, tvrde da je test je nemoguće razlikovati latentne infekcije tuberkuloze od aktivne tuberkuloze. Stoga, u područjima s visokom razinom infekcije, test nije izravno dijagnostički. Međutim, u našoj zemlji se može koristiti za razlikovanje infekcije tuberkuloze kod djece od alergije nakon cijepljenja, te za procjenu razine specifičnog imuniteta u postupku liječenja.

    Trenutno se proučava domaći testni sustav za određivanje indukcije sinteze IFN-γ specifičnim tuberkuloznim antigenima in vitro.

    Imuni status i tijek tuberkuloze, imunološko ispravljanje

    U procesu liječenja tuberkuloze kod ljudi postoje promjene u antigenemiji i stanju imunološkog sustava.

    Podaci o promjenama u eksudatu i tkivima uglavnom su kontradiktorni. Jedino što se može primijetiti s dobrim razlogom je da u tuberkularnim granulomima, u pravilu, detektira značajan broj aktiviranih T-limfocita.

    Ima smisla zadržati još dvije odredbe potrebne za razumijevanje uloge imunoloških mehanizama u liječenju tuberkuloze kod ljudi:

    • Pacijenti s AIDS-om imaju posebno visoku učestalost višestrukog otpornosti na lijek;
    • s višestrukom rezistencijom na lijek (i u odsutnosti HIV infekcije), poremećaji imuniteta (osobito veza T-stanica) su posebno značajni.

    Kada tuberkuloza široko primijeniti različite metode imunološko: to je prije svega lijekovi koji djeluju prvenstveno na imunitet T-stanica i sustava mononuklearnih fagocita (timusa hormoni, izoforon, likopid, polioksidony et al.). kao i cijele (atenuirane) mikobakterije i njihove komponente.

    Molekularno-biološka dijagnoza tuberkuloze

    Za postupci molekularne biologije u dijagnostici zaraznih bolesti uključuju, uglavnom, metoda se temelji na manipuliranje s genomske materijalom bakterijskih i virusnih patogena da se identificira specifična genetskog materijala - DNA segmenti koji imaju sekvencu nukleotida koji su specifični za određeni tip ili patogenih sojeva za analizu specifične DNA sekvence u genima koji određuju osjetljivost patogena na određene ljekovite tvari, kao i za funkcionalnu analizu aktivnost određenih gena patogena. Tehnike molekularne biologije su široko u znanstvena istraživanja i praktične primjene u dijagnostici i praćenju različitih bakterijskih i virusnih infekcija nakon otvaranja 1985. godine, Carrie Myullisom (dobitnik Nobelove nagrade. 1989) lančane reakcije polimeraze.

    Načela i mogućnosti postupka lančane reakcije polimeraze

    PCR omogućuje umnožavanje (umnožavanje) in vitro nukleotidne sekvence (fragment DNA patogena) nekoliko sati milijun puta. Reakcija u prisutnosti pojedinačnih lanaca DNA određuje iznimno visoku osjetljivost analize.

    Nukleotidni slijed određenih područja lanca DNA određuje genetički identitet mikroorganizma koji objašnjava visoku specifičnost PCR-a.

    Vrijednost ove tehnike za detekciju i istraživanje karakteristika uzrokovane bakterijama Mycobacterium tuberculosis bioloških svojstava mikroorganizma koji imaju vrlo sporo rastu: vremena udvostručavanja Mycobacterium tuberculosis DNA kada kultiviranje je 12-24 sati.

    Načelo PCR metode sastoji se u pojačanju - višestrukim, milijunima puta. množenjem odjeljaka specifične DNA sekvencije u mikrovolumu cijevi tijekom cikličkog ponavljanja sljedećih tri reakcijska stupnja, od kojih svaka prolazi u različitom temperaturnom režimu:

    • Faza I - denaturacija dvolančane DNA nakon zagrijavanja s divergencijom lanaca;
    • Faza II - komplementarna vezanja (hibridizacija) klica (primer oligonukleotid) s krajnjim dijelovima lanaca strogo određene, za odabrane množenjem fragmenta DNA;
    • Faza III - završetak DNA lanca fragmenta uz pomoć termostabilne DNA polimeraze.

    Za pojačavanje in vitro, moraju postojati molekule matrične DNA. Četiri vrste deoksinukleozid trifosfata (nukleotida) koja sadrži odgovarajuće dušične baze: adenin (A), timin (T), gvanin (G), citozin (C); umjetno sintetizirani početni oligonukleotidi (primeri) koji se sastoje od 18-20 parova baza; termostabilnu enzimsku DNA polimerazu koja ima optimalnu temperaturu od 68-72 ° C i magnezijevim ionima.

    Specifičnost PCR-a ovisi o izboru fragmenta DNA. U skladu s tim, sintetizirani su oligonukleotidi bočnih sjemena. Specifičnost hibridizacije i završetka lanca DNA je zbog načela komplementarnosti sljedećih para dušičnih baza: adenin-timina, gvanin-citozin.

    Odrediti genomske tuberkulozan mikobakterija kompleks najučinkovitiji meta pojačavanje kod većine sustava za ispitivanje odabranih DNA fragment od IS6110, koja je u većini sojeva Mycobacterium tuberculosis genoma ima značajan broj (10-20) ponavljanja, koja omogućava, uz specifičnost, visoka osjetljivost testa. U isto vrijeme, Mycobacterium tuberculosis, opisan s malim brojem ponavljanja ili ne IS6110 fragmenta.

    Izolacija DNA molekula iz biološkog uzorka

    Za PCR DNA molekula patogena mora izolirati iz biološkog materijala u minimalnom volumenu, uz minimalnu količinu nespepificheskoy DNA i različitih inhibitora enzima - DNK polimerazom.

    Priprema uzoraka treba provoditi pod uvjetima koji sprečavaju unakrsno onečišćenje uzoraka pomoću izoliranih DNA molekula. Da bi se to postiglo, potrebno je prethodno tretirati sobu s ultraljubičastim, podovima i radnim površinama stolova i uređaja, s otopinama koje sadrže klor. Također obvezno korištenje čistih rukavica, jednokratnih epruveta i savjeta za automatske pipete.

    Da se izdvoji DNA iz Mycobacterium tuberculosis iz kliničkih uzoraka (cerebrospinalna tekućina, bronhijalna ispiranje) ne sadrži veliki broj stanica, staničnih ostataka, ili njihove soli, koja je dovoljna da centrifugi uzorak 3-4 tisuća. Rpm, dodati u mulj 20-30 ul 2% otopine Triton X-100 i zagrijavajte na 90 ° C tijekom 30 minuta.

    Za pripremu uzoraka sputuma mora biti učinkovita rastapanje, koji se obično koristi za 4% otopine natrijevog hidroksida i N-acetil-L-cisteina (NALC) u količini od 50-80 mg po uzorku su - ovisno o viskoznosti uzorka. NALC otopina mora biti pripremljena ex tempore ili NALC prašak može se izravno dodati suhom uzorku. Nakon centrifugiranja uzorci moraju rastopiti 15 minuta na 3,5-4 tisuća. Rpm (3000 g) u volumenu od 50 ml epruvete s čepom na navoj, tj pod istim uvjetima koji se preporučuju za prerastu pripremu sluzi.

    Za ekstrakciju DNA iz postupka peleta se koristi najčešće temelje na upotrebi 5-6 molarne otopine gvanidin izotiocijanata lizu reagensom kao i mikroporozna čestica i silicijevog oksida ( „dijatomejska zemlja”) sorbing molekule DNA. Nespecifično tvari, uključujući inhibitore moguće, zatim ispere u 2,5 molarne otopine gvanidinijevog izotiocijanata i otopinom etanola, nakon čega se DNA molekula desorbira u vodi, a ta uzoraka koristi za izvođenje PCR. Kako bi se pojednostavila tehnologija ekstrakcije DNA, "dijatomejska zemlja" često se zamjenjuju magnetskim mikročesticama obloženim silicijskim oksidom. U ovom slučaju umjesto centrifugiranja se koristi posebni magnetski stalak za mikrotube kako bi se istaložile čestice.

    U Rusiji je razvijena izvorna metoda imunomagnetskog odvajanja mikobakterija s kasnijom ekstrakcijom DNA patogena. Za Mycobacterium tuberculosis imunomagnetskim separacijom koristeći ferroparticles veličine 3-5 mikrona, prevučena silikagela, na koji su vezani, kemijskom lijepljenje poliklonalna (zeca) protutijela na Mycobacterium tuberculosis. Uzorci sputuma nakon alkalne lize neutraliziraju se kiselom otopinom tris-HCl i inkubiraju s imunomagnetskim sorbentom. Zatim se imunoferroparticles skupljaju pomoću magnetske šipke s zamjenjivim vrhom, prenesu u mikrotubu i istaložu. dodati 20-30 ul otopine 2% Triton X-100 i zagrijati 30 minuta na 90 ° C. Supernatant se koristi kao DNA predložak za PCR analizu.

    Teški problem je izolacija DNA mikobakterijskog tuberkuloza iz biopsijskih uzoraka. Za biopsiju enzima, enzim proteinaza K se koristi pri konačnoj koncentraciji od 200-500 mg / l pri temperaturi od 56 ° C preko noći. Nadalje se koristi jedna od poznatih metoda. Višak nespecifične DNA u PCR analizi biopsija često uzrokuje inhibiciju reakcije koja zahtijeva ponovnu ekstrakciju DNA.

    Metode za otkrivanje rezultata

    Nakon završetka reakcije, amplificirani fragmenti DNA patogena identificirani su različitim metodama.

    Metoda gel elektroforeze dobro je poznata. Tako dobiven fragment DNA su identificirani pomoću pozitivna kontrola koja sadrži željene specifičan fragment DNA ili unaprijed poznato veličine (broj parova baza fragment) koja je određena pomoću standardne molekulske marker.

    U prisutnosti specifične boje, etidijev bromid je uključen u dvolančanu DNA. sintetizirani fragment DNA detektira se kao svjetlosna vrpca pod djelovanjem ultraljubičastog.

    Veličina fragmenta DNA, određena elektroforezom s udaljenosti od početka, mora odgovarati poznatom markeru molekulske težine ili pozitivnoj kontroli.

    Ostali postupci određivanja na temelju rezultata PCR hibridizaciji jednolančani PCR proizvodi s oligonukleotida komplementarna - DNA sonde obilježen biotinom, nakon čega slijedi određivanje putem enzimske reakcije, na primjer vezanjem za streptavidin-alkalne fosfataze biotin.

    Na temelju ove vrste detekcije, stvoreni su PCR analizatori u kojima se detekcija PCR rezultata provodi automatski kao rezultat čitanja optičke gustoće u uzorcima nakon manifestacije enzimske reakcije.

    Nedostaci tih metoda su mogućnosti intralaboratorijske kontaminacije pomoću prilično kratkih fragmenata DNA molekula. Kada molekule uđu u nove uzorke, one postaju matrica za PCR i dovode do lažnih pozitivnih rezultata.

    U tom smislu, kako bi se spriječili lažno pozitivni rezultati, uvode se stroga pravila za odvajanje i izolaciju prostora: ekstrakciju DNK iz bioloških uzoraka; prostorije za otkrivanje rezultata (elektroforeza) iz čiste zone. Ti prostori su zona vjerojatnog onečišćenja. Još jedno izolirano područje je čista prostorija za uvođenje DNA uzoraka koji se ispituju u epruveti s reakcijskom smjesom za PCR. Konačno, pretpostavlja se da glavni uređaj - DNA-pojačalo - treba biti postavljen u zasebnu, moguće uredsku, sobu.

    Da se spriječi kontaminacija proizvoda iz prethodnih reakcije - neki Likon-amp PCR test sustava umjesto dezoksinukleozidtimidina sadrži dezoksinukleoziduridin koji, kada je ugrađen u vitro sintezu spoja, umjesto u pravilnom položaju, tj Duksionska baza timina prisutna u nativnoj DNA zamijenjena je uracilom. Uracil DNK glikozilazom se doda u reakcijsku smjesu na analit, uništava samo kontaminirajućih fragmenti deoksiuridin, ali ne i DNA nativne analizirani.. Naknadno zagrijavanje na 94 ° C inaktivira ovaj enzim i ne ometa amplifikaciju u PCR-u.

    Postoji testni sustav koji se temelji na izotermnoj amplifikaciji rRNA, za koju se najprije provodi reverzna transkripcija i sinteza DNA molekula. što je, pak, matrica za naknadnu sintezu molekula RNA. RNA amplikoni su detektirani pomoću akridinske obojene DNA sonde kada su hibridizirane u otopini reakcijske cijevi. Ova metoda, uz visoku osjetljivost, ima prednost analize u jednoj cijevi koja sprečava onečišćenje. Prema autorima, osjetljivost ove metode u respiratornim uzorcima doseže 90% s specifičnosti 99-100%.

    Nove metode detekcije provode se u realnom vremenu PCR. Ove metode razlikuju se ponajprije u tom PCR-u i detekcija njegovih rezultata provodi se istodobno u jednoj zatvorenoj cijevi. To ne samo da tehnološki pojednostavljuje tehniku ​​analize, nego također sprječava onečišćenje laboratorijskih prostorija i uzoraka za ispitivanje sa proizvodima prethodnih PCR.

    U realnom vremenu PCR rezultate za otkrivanje je zbog fluorescencije se javlja tijekom fluorogenu hibridizacijsku probu s DNA amplifitsi Rui-PCR tijekom specifičnog DNA fragmenta. Struktura fluorogenski DNA sonde konstruiran tako da je fluorescentni marker oslobađa uslijed enzimatske reakcije ili udaljeni od molekule gasioca fluorescencije samo pod određenim hibridizacije sa željenom DNA molekule biti umnožene u PCR. Kao broj molekula proba hibridizirana s povećanjem fluorescencije je proporcionalna detektirane razine broj molekula od amplificirane proizvoda. Budući da u svakom broju ciklusa PCR fragment DNA molekule množi pola, broj ciklusa u kojem se određuje fluorescencija i povećava obrnuto proporcionalna broju molekula DNA u početnom uzorku. Ako je reakcija predstaviti kao kalibratora nekoliko različitih poznatih koncentracija molekula DNA fragment od odgovarajućih Mycobacterium tuberculosis, pomoću računalnog programa može se izračunati i količinu genomske DNA u ispitivanog materijala.

    Svaki standardni uzorak je dupliciran. Kvantitativni kriterij je minimalni broj PCR ciklusa potrebnih za početak i rast određene fluorescencije. Na apscisi - broj ciklusa; ordinata je vrijednost fluorescencije. Koncentracije DNA su obrnuto proporcionalne broju ciklusa potrebnih za pojavu fluorescencije. U desnom stupcu (21-32) označeni su brojevi ciklusa za odgovarajuće koncentracije. Razlike između 10-strukih koncentracija DNA fragmenata 10 2 -10 6 ml - 3.2-3.4 ciklusa. Za dva bolesnika, koncentracije fragmenata IS6110 bile su oko 10 3 / ml i 10 4 / ml. Uzimajući u obzir broj ponavljanja (6-20) fragmenata analiziranih u genomu Mycobacterium tuberculosis, broj mikobakterija u kliničkim uzorcima iznosi oko 100 i 1000 stanica.

    Korištenje PCR-a u dijagnostici tuberkuloze

    PCR metoda je najčešće korištena za ubrzanu dijagnozu tuberkuloze - detekcija mycobacterium tuberculosis u kliničkim primjercima: sputuma. bronhijalno ispiranje, pleuralni eksudat, urin, cerebrospinalna tekućina, osteoliza punctate, aspirati ženskog genitalnog trakta i razni uzorci biopsije. U studiji u Nizozemskoj su proučavali oko 500 sputuma i ispiranje bronha uzorke iz 340 bolesnika s potvrđenom dijagnozom plućne tuberkuloze usporediti osjetljivost PCR metoda, mikroskopa i studija kulture brisa. Osjetljivost analize bila je 92,6,88,9 i 52,4%. Specifičnost svih metoda bila je oko 99%.

    Uspoređivana je učinkovitost detekcije mikobakterijskih tuberkuloznih mikroskopija, sjemenki na Levenstein-Jensen mediju, VASTES test sustav i PCR analizu. PCR je pokazala osjetljivost od 74,4%, mikroskopija - 33,8%, sijanje na gustu mediju - 48,9% i VASTES - 55,8%. Prosječno vrijeme detekcije sjemena na mediju Levenstein-Jensen je 24 dana. VASTES - 13 dana, PCR - 1 dan.

    Također se raspravlja o mogućnostima korištenja PCR-a kao osjetljive i brze metode za praćenje učinkovitosti liječenja tuberkuloze.

    Otkrivanje Mycobacterium tuberculosis DNK PCR-om s učinkovitom kemoterapije utvrđen tijekom dužeg vremena - u prosjeku 1,7 mjeseci u usporedbi s razmazu definiranim pod fluorescentnim mikroskopom, te 2,5 mjeseci u odnosu na bakteriološku pregled.

    Dijagnoza izvanpulmonarnih oblika tuberkuloze

    Vrijednost kao osjetljiv PCR postupkom je osobito velika za izvanplućni oblika, kako se on oblikuje u skladu s ovim kliničkim i rendgenske metode konvencionalne bakteriološke metode za određivanje Mycobacterium tuberculosis u dijagnostičkim materijalima nedjelotvornim.

    U ispitivanju uzoraka urina PCR Rezultati su bili pozitivni na 16 od 17 bolesnika s aktivnim TB i negativnog mokraćnog 4 bolesnika neaktivnom bubrega tuberculosis i 39 bolesnika s urinarnim nontubercular bolesti sustava.

    U slučajevima sumnje na tuberkulozu je dokazana učinkovitost PCR analize u istraživanju aspirata koštane srži u bolesnika s groznicom nepoznatog podrijetla. Za dijagnosticiranje tuberkuloznog limfadenitisa u djece je proučavano 102 aspirata bakterija i uzorak biopsije 67 djece s sumnjivim tuberkuloznim limfadenitisom. Dobiveni su pozitivni rezultati: 71,6% real-time PCR. fluorescentna mikroskopija - 46,3%. istraživanje kulture - 41,8%. U istraživanju 50 biopsija limfnih čvorova kod pacijenata s "mačkima", svi rezultati su bili negativni. Tako je dokazana 100% specifičnost PCR analize. U istom radu, s biopsijom probijanja limfnih čvorova, dokazana je mogućnost otkrivanja M. avium.

    Dijagnoza tuberkuloze ženske genitalije za neplodnost, kao što je poznato, jedna od najtežih dijagnostičkih problema. Pri ispitivanju PCR biopsija endometrija, endometrija usisava tekućina uzorci Douglas prostor 14 (56%) od 25 pacijenata laparoskopski ispitanih sumnja tuberkuloze, dobiveni su dobri rezultati. Korištenje mrlja mikroskopije i kulture dobivene su 1 i 2 rezultate. Ovi slučajevi također su bili PCR-pozitivni. Većina PCR-pozitivni rezultati odnose se na slučaj s karakteristikama tuberkuloze prema histološki pregled; manji broj - s sumnjom na tuberkulozu prema laparoskopskim podacima. Samo jedan pozitivan PCR rezultat dobiven je u nedostatku podataka o laparoskopske tuberkuloze.

    Kod dijagnosticiranja izvanpulmonalnih oblika tuberkuloze, kliničari često postavljaju pitanje o mogućnosti otkrivanja patogena prilikom ispitivanja uzoraka krvi PCR metodom. Književni podaci ukazuju da je moguće otkrivanje DNA iz mikobakterijum tuberkuloze iz uzoraka krvi s dalekosežnim oblicima HIV infekcije. DNK mycobacterium tuberculosis je otkriven samo s generaliziranom tuberkulozom različitih organa u bolesnika s transplantiranim bubrezima i imunosupresijom.

    Identifikacija vrsta mikobakterija

    PCR metoda može biti vrlo učinkovit za brzu identifikaciju mikobakterija tuberkuloze kompleksa i nekih vrsta mikobakterija nontubercular nakon primitka njihov početni rast. U tom slučaju, korištenje PCR može uštedjeti 7-10 dana potrebnih za naknadne kulture pozitivne identifikacije. Istraživanje PCR je tehnički vrlo jednostavna, jer ne zahtijevaju kompliciranu priprema uzorka kliničkog materijala kako bi se postigla visoka osjetljivost. U studiji 80 pozitivno u ovom test sustavu (MB Vasto. Organon društvo) svi pozitivni kulture PCR bili su strogo specifična i drži 1 dan. Identificirati druge vrste mikobakterija u pripravi DNA patogena kulture hibridiziranog specifičnih DNA proba označenih akridina i sojeva otkrivene pojavom kemiluminescencije preko chemiluminometer ili nitrocelulozne trake s vizualnom procjenom nakon hibridizacije. Koristeći takav kit identificirala ograničen broj vrsta: Mycobacterium tuberculosis kompleksa. M. avium, M. avium kompleks, M. kansasii i M. gordonae.

    A.Telenti i sur. razvila relativno jednostavan i jeftin način identifikacije vrsta klinički važnih vrsta mikobakterija PCR i zatim obradom s dva enzima (enzimi restrikcijskih imaju svojstva smanjiti DNA molekulu na određene točke). DNA fragment je amplificiran. kodira protein toplinskog šoka (65 kDa), a zatim se tretira u dobivenog PCR fragment DNA od 439 parova nukleotida odvojeno dva enzima - Bste II i III Hae. Zatim se analizira pomoću elektroforeze na agaroznom gelu dobije se dva proizvoda, određivanje njihove veličine (broj parova baza) koristeći standardni skup DNA fragmenata (molekularni DNK-markere) u dužini od 100 do 1000 parova baza. U svaki od specifičnih tipova (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii M.fortuitum) otkriti dvije ili tri DNA fragmenti različite veličine za svaku restrikcijskog enzima. Kombinacija različitih dobivenih DNA veličina omogućuje razlikovanje tih vrsta među sobom.

    Razvija se tehnologija bioloških DNA mikropraksa. koji će pomoći u identificiranju više od 100 vrsta mikobakterija u jednoj studiji.

    Identifikacija vrsta također se može provesti PCR amplifikacijom varijabilne regije 16S rRNA koja slijedi sekvenciranje amplika u usporedbi s odgovarajućom primarnom strukturom koja omogućuje identificiranje više od 40 vrsta mikobakterija.

    Uz pomoć PCR-a može se provesti identifikacija vrste unutar kompleksa mikobakterija tuberkuloze, uključujući diferencijaciju M. bovis i M. bovis BCG. Da bi se to postiglo, analizira se prisutnost ili odsutnost nekih gena u genomskim područjima RD1. RD9 i RD10. RD1 je odsutan u M. bovis BCG, ali je prisutan u virulentnim vrstama, uključujući M. bovis.

    Određivanje osjetljivosti na lijek Mycobacterium tuberculosis PCR - om

    Ciljevi molekularno genetičke metode osjetljivosti lijeka ili otpornost Mycobacterium tuberculosis smanjiti za identifikaciju mutacija u određenim nukleotidnim sekvencama poznatih gena. Osnovni postupci temelje se na izravnom prochityvanii (sekvenciranje) ovih sekvenci ili nakon amplifikacije hibridizaciju biotinom obilježene DNA fragmenata amplificiranih tijekom PCR DNA sonde. Obje alternative uključuju identificiranje nukleotidne supstitucije u sekvenci koje koriste DNA sonde dovode do nedostatka ili nepotpunog hibridizaciju u nitroceluloznu membranu korištenjem enzimskog konjugata (Streptavidin-alkalna fosfataza) - Postupak lipa-Rif-TB.

    Postupak za mjerenje fluorescencije u lokalno na fiksni microsections DNA sonde komplementarna poznate mutacije u PCR amplificiranih regija gena odgovornih za otpornost na lijek ili osjetljivosti, nazvane mikrobiochipov metoda. Glavni algoritam za provedbu ovog istraživanja je sljedeći. Nakon izolacije DNA iz kliničkog uzorka ili kulture mikobakterija je provesti PCR amplifikacije odgovarajućih fragmenata rpoB gena odgovornog za osjetljivost na lijek ili rifampicin i katG inhA gena koji kodiraju proteine ​​odgovorne za Mycobacterium su osjetljivost na isonazid. Rezultati su procijenjeni PCR elektroforezom na agaroznom gelu, u kojoj je potvrditi primitak odgovarajućih DNA fragmenata na željenu duljinu. Zatim se provodi drugi krug PCR-a radi uvođenja fluorescentne oznake u DNA. Rezultati PCR-a opet se potvrđuju gel elektroforezom. Nakon toga, hibridizacija je provedena (inkubacija preko noći), nakon čega slijedi ispiranje se dobiveni materijal na biočip, što je veliki broj fiksiran u malu staklenu ploča kratkih lanaca DNA (sonde) koje su komplementarne nukleotidne sekvence tipa Mycobacterium tuberculosis lijek osjetljiv na mjestima moguće mutacije. kao i na mutantne sekvence odgovorne za rezistenciju na lijek. Lokacija DNA sondi na tanjuru - strogo definirana, a razina fluorescencije promatrane nakon hibridizacije za određivanje rezultata pomoću posebnog uređaja za čitanje instaliran. S tim u vezi, rezultati analize određuju se posebnim računalnim programom.

    Posljednjih godina razvijene su alternativne metode za određivanje osjetljivosti lijekova mikobakterija tuberkuloze na temelju PCR tehnologije u stvarnom vremenu, što omogućuje provođenje ovih studija u ispitivanju zatvorene epruvete.

    Na sl. 13-13 daje rezultat analize kliničkih kultura mikobakterije tuberkuloze u određivanju rezistencije na lijek na rifampicin PCR realnom vremenu: 218 - kontrolni uzorak (osjetljiv na rifampicin); 93 - pozitivna kontrola za mutaciju Ser-Trp TCG-TGG; 4482 - pozitivna kontrola za mutaciju Ser-Leu TCG-TTG; 162-322 - eksperimentalni uzorci. Rezultat izračuna kinetičkih krivulja amplifikacije na 4 kanala: kanal 1: 393 - pozitivna kontrola za mutaciju Ser-Trp TCG-TGG; kanal 2: 4482 - pozitivna kontrola za mutaciju Ser-Leu TCG-TTG; 162, 163, 172, 295 - eksperimentalni uzorci; kanal 4: kinetičke krivulje pojačanja svih uzoraka koji sudjeluju u eksperimentu. Pozitivna kontrola reakcije amplifikacije. Zaključci: Na temelju rezultata analize, identificirane su sljedeće mutacije koje određuju otpornost na rifampicin: u uzorcima 162,163,172,295-Ser-Leu TCG-TTG. Isti princip korišten je za određivanje otpornosti na lijek s izoniazidom za gene katG i inhA, koji određuju najčešće mutacije.

    Identifikacija soje mycobacterium tuberculosis

    Najviše temeljito istraživanje Postupak identifikacije sojeva Mycobacterium tuberculosis je tehnika naziva ograničenje polimorfizam duljine fragmenta (RFLP RFLP,, ili na engleskom jeziku), a koji se temelji na fragmentirovanin (restrikcijskom) Mycobacterium tuberculosis DNA enzima Pvu II i fragmenti dobiveni naknadne hibridizaciju s određenim specifičnim sekvencama na DNK njegov ponovljeni element IS6110. Intraspecifičko varijabilnost ostvaruje se različitim brojem ponavljanja IS6110 i njihov položaj na DNK. kao i raznim udaljenostima između pojedinih točaka napada restrikcije enzima (restrikcijskih mjesta koja) i element IS6110. Ova je tehnologija vrlo složena i dugotrajna. Nakon tretmana s DNA iz kulture Mycobacterium tuberculosis, gel elektroforeza je izvedena s restrikcijskim enzimom, i zatim su prenesene DNA fragmenti različitih duljina na nitroceluloznu membranu, hibridizacija je provedena s fragmentima IS6110 elementu i detektira pomoću enzimske reakcije. Dobivena uzorak specifične DNA vrpce karakterizira određeni soj Mycobacterium tuberculosis. Pomoću računalne analize otkriva se identitet ili povezanost sojeva. Unatoč činjenici da je RFLP metoda najdjelotvornija, tj. identificira najveći broj razlika u analiziranim sojevima, to je neučinkovit za mali broj (manje od 5) IS6110-ponavljanja opažene u nekim sojevima. Na sl. 13-14 prikazuje rezultate RFLP-tipizacije sojeva.

    Alternativa može biti metoda spoligotipizacije - analize polimorfizma spacer DNA sekvenci - intermedijera između izravnih ponavljanja DR regije. Pri provedbi spoligotipizacije sojeva, PCR se izvodi s primerima koji vežu DR regiju, nakon čega nastaju fragmenti različitih duljina koji hibridiziraju s varijabilnim međupredmetama DNA. Prikazana je analiza distantnih sekvenci DR regije. prema istraživačima, jednostavniji, produktivniji i prikladniji za primarnu analizu sojeva i preliminarnu epidemiološku analizu, kao i izravno istraživanje kliničkog materijala.

    Očito, učinkovitija i tehnološki pristupačnija metoda je VNTR (kratica engleskog jezika) ili metoda za određivanje promjenjivog broja točnih ponavljanja tandema u DNA mycobacterium tuberculosis. Ova se metoda temelji samo na korištenju PCR-a i ne zahtijeva dodatnu manipulaciju. Budući da je broj tandem ponavljanja u različitim vrstama i različitim lokusima različit, fragmenti različitih veličina određuju se i analiziraju na nastalom elektroforemramu produkata PCR. Prema istraživačima, korištenje VNTR postiže veći stupanj diskriminacije sojeva nego s RFLP metodom.

    Posljednjih godina mnogo je pažnje posvećeno raspodjeli sojeva Mycobacterium tuberculosis obitelji W-Beijing (koji se ponekad naziva i soj Pekinga), koji su uglavnom otporni na lijekove.

    Osnovni zahtjevi za kvalitetu molekularnih bioloških istraživanja

    Osnovni regulatorni dokumenti za PCR

    Narudžbe Rusko ministarstvo zdravstva: №45 od 02.07.2000 g.. broj 109 od 21.03.2003 g.. broj 64 od 21.02.2000, Smjernicama: 1.3.1888-04 „Organizacija rada u studijama PCR materijala zaraženo patogenim biološka agensi skupine III-IV patogenosti "; 1.3.1794-03 "Organizacija rada u istraživanju PCR materijala, zaražena mikroorganizmima skupina I-II patogenosti". 2003. 3.5.5.1034-01 „dekontaminaciju materijala, inficirane bakterije I-IV patogenosti grupe kada se koristi PCR”, 2001., 11 dodatak za združene uputama za mikrobioloških metoda ispitivanja na identifikaciju, dijagnostiku i liječenje tuberkuloze.

    Osoblje

    Izvršenje molekularnu bioloških istraživanja mogu držati doktora kliničke laboratorijske dijagnostike, liječnici bacteriologists, virolozi, liječnika, biologa, klinički dijagnostički laboratorij, kao i stručnjaka sa srednjom medicinskom obrazovanju, prošao specijalizaciju i usavršavanje na propisani način.

    Raspored laboratorijskih prostorija

    Sljedeće laboratorijske sobe su potrebne:

    • Područje za rukovanje uzorcima je laboratorij prilagođen za rad s infektivnim agensima III-IV skupina patogenosti, prema Metodičkim uputama 13.1888-04.
    • Zona za pripremu reakcijske smjese PCR - laboratorijska prostorija koja osigurava zaštitu od unutarnje laboratorijske kontaminacije - "čista" zona.
    • • Ako se koristi elektroforeza ili hibridizacija za analizu PCR proizvoda. laboratorij prostorija u kojoj se množi fragmenti DNA ekstrahirane iz cijevi i pojačanje, odnosno mogu doći u okoliš, u skladu sa zahtjevima za PCR laboratorija (1.3.1794-03 smjernice, navođenja 1.3.1888-04) mora biti u potpunosti se izdvaja iz prostora navedenih u prethodnim stavcima. To bi trebao biti isključen iz zone kretanja u zoni elektroforezu za rukovanje uzorkom i „čiste” područje bilo osoblja, opreme i sve druge materijale i objekte, kao i prijenos zraka kroz ventilacijski sustav, ili kao posljedica propuha. Ova zona nije potrebna za fluorimetrijsku detekciju PCR proizvoda.
    • Soba za dokumentaciju i obradu rezultata opremljena je računalima i potrebnom uredskom opremom. Ova soba može sadržavati opremu koja omogućuje otkrivanje PCR proizvoda bez otvaranja cijevi. - fluorescentni PCR detektori i termalni cikloni za real-time PCR.

    Sanitarni i epidemiološki zahtjevi za primarnu primjenu sputuma slični su standardnim mikrobiološkim zahtjevima za rad s mikobakterijama tuberkuloze.

    Završetak laboratorijske opreme za PCR dijagnostiku

    Laboratorij uključuje opremu za sljedeće sobe.

    • prostor za pripremu uzorka, sadrži sljedeću opremu: laminar II klase zaštite "SP-1.2": termostat sa čvrstim stanjima s pokrovom grijanja za epruvete tipa "Eppendorf"; mikrocentrifugiranje pri 13.000 okr / min; centrifuga (Vortex); hladnjak s temperaturom od -20 ° C do +10 °; pipete promjenjivog volumena serije "Rroline"; pumpa s OM-1 trapom; stativ za pipete; tronožac radna stanica 200x0,5 ml; stativna radna stanica 50 x 1.5 ml; Držači za pohranjivanje epruvete 80x1,5 ml;
    • Sobu za pripremu reakcijske smjese: PCR-kutija za zaštitnu komoru ("Laminar-C" 110 cm); centrifuga - Vortex; Varijabilne volumne pipete serije Proline; stativ za pipete; tronožac radna stanica 200x0,2 ml; Držači za pohranjivanje epruvete 80x1,5 ml; hladnjak s temperaturom od -20 ° C do + 10 °;
    • soba za elektroforezu: kamera za horizontalnu elektroforezu; napajanje; transilluminator;
    • DNA pojačala ili analizator nukleinske kiseline (PCR u realnom vremenu) s računalom i softverom; mogu se postaviti u svaku rezervnu sobu. Ako se koristi PCR tehnologija u realnom vremenu. prostorija za elektroforezu nije potrebna.

    Vanjska kontrola kvalitete

    Da bi bili sigurni u postizanje objektivno pouzdanih rezultata, laboratoriji bi trebali sudjelovati u sustavu vanjske procjene kakvoće laboratorijskih istraživanja.

    Sudionici u sustavu kontrole kvalitete primaju; 12 bočice liofiliziranih stanica suspenzije bakterija od kojih su dvije sadrže E. coli E. kokosove, 3 bočice s Mycobacterium tuberculosis (soj avirulentni) na 10 2 / ml; 3 ampula sa stanicama sličnog soja u koncentraciji od 10 4 / ml; 2 Ampule nontubercular Mycobacterium avium-intracellulare M. i M. kansasii u koncentraciji od 10 5 / ml.

    Distribuirani testovi za vanjsku procjenu kvalitete prethodno su testirani u dva nezavisna laboratorija s velikim iskustvom u ovom području.